卷心菜菌相特征及生食安全性研究.pdfVIP

201l食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 卷心菜菌相特征及生食安全性研究 马云1’2，代养勇3，贾俊涛2、李正义2，祝素珍2、赵丽青2、刘云国2 1．中国海洋大学食品科学与工程学院，青岛266003； 2．山东出入境检验检疫局技术中心，青岛266002； 3．山东农业大学食品学院，泰安271018 摘要：通过对卷心菜各层细菌、霉菌、酵母菌、乳酸菌总数的检测，并首次采用基因组DNA提取、 16SrRNA序列的PCR扩增、PCR产物直接测序及序列对比分析等手段研究卷心菜微生物菌相特征。 试验结果表明，卷心菜由里到外细菌总数逐层下降，但各层均存有细菌，共发现6种菌株，未发现 致病性细菌。霉菌总数、乳酸菌总数显示，卷心菜去掉三层后一般不会受到外界致病菌的污染，食 用安全性高。 关键词：卷心菜；菌相特征；PCR；食用安全性 ●’JL‘．oo●一 1 日IJ吾 oleracea 卷心菜，学名结球甘蓝(Brassica L．var．capitata oleracea L．)的变种，又名洋白菜(北方)、包菜(南方)、圆白菜、包心菜、莲花白(山西和陕西)、花白、 茴子白等。起源于地中海沿岸，卷心菜在外国的地位很高，犹如白菜之在中国。甘蓝具的耐寒、抗病、适应 性强、易贮耐运、产量高、品质好等特点。16世纪开始传入中国现在我国各地普遍栽培，是东北、西北、华 北等地区春、夏、秋季的主要蔬菜之一。 中国人有吃熟食的习惯，所以蔬菜的生物污染危害，一直没有受到国人的重视。但随着人们生活水平的 提高，以及追求新鲜、营养的需要，对生食卷心菜的需求会越来越高。随着全球对鲜切蔬菜需求量的日益增 加，因其携带的病原物成为不可忽视的安全性问题【l，21。资料表明，目前食源性疾病数量的增长与新鲜农产品 消耗量有关lj，4。。 卷心菜在我国的消耗量相当大，然而，对卷心菜中各层中的微生物状况，未见有相关报道。本研究对卷 心菜各层的微生物进行菌落计数，并对分离到的微生物进行鉴定分析，研究卷心菜菌相特征。 2材料与方法 2．1材料 2．1．1样品 卷心菜：购自大型超市，用无菌袋封存，买回后，放于4℃冰箱中，并在2h内进行检测。 2．1．2培养基 缓冲蛋白胨水(BPW)、平板计数琼]旨(Platecounty 浸膏琼脂、PDA：北京陆桥技术有限公司，PertrifilmTM测试片：3M公司。 2．1．3试剂 细菌基因组DNA提取试剂盒：北京天根生物工程公司生产；化学试剂均为分析纯。 2．1．4主要仪器 生物安全柜、培养箱：日本三洋公司；高速离心机：湖南凯达离心机厂。电泳仪：北京六一仪器厂；凝 胶成像系统：法国Vilber Lourmat公司)；EependorfPCR仪：德国Eependorf公司。 2．2菌落计数方法 2011食品安会技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 在无菌条件下，在卷心菜的每一层叶片上取25 mL2％缓冲蛋白胨水，在振荡器上震荡 g样品，加入225 5 倍。 (1)菌落计数方法参照国家标准GB4789．2．201015】。采用倾注和涂布两种方法 (2)依据GB4789．15—2010进行霉菌和酵母菌计数试验f6】。 (3)依据SNfr1941．2-2007进行乳酸菌计数试验(7j。 23菌株形态学观察及分离 借助肉眼观察菌落和显微镜观察等技术，找出卷心菜去掉外面三层后表面细菌存在的菌株类型，并进行 分离，做进一步鉴定研究。 2．4卷心菜表面细菌的鉴定 2．4．1基因组DNA的提取 根据菌落形态分析结果选取得到菌株，挑取纯化好的单一菌落，采用细菌基因组DNA提取试剂盒 BactedaDNAKit)，根据试剂盒说明书提取细菌DNA。 (TIANamp 1 2．4．26SrRNA序列的PCR扩增[8] 5．GGTTACClvrGll’ACGACrr_3。