玉米花粉胚状体发育过程中DNA、RNA、蛋白质含量及合成动态变化.pdfVIP

遗 传 学报，17(6)449-454,1990 滋cta Cenetica Sinica 玉米花粉胚状体发育过程中DNA,RNA, 蛋白质含量及合成动态变化 路铁刚）‘王义深郑国锡 兰（州大学细胞生物学研究室） 继代培养的玉米花粉胚状体的发育过程可划分为 ‘个时期：胚性细胞团时期、球形胚时 期、心形胚时期、梨形胚时期、子叶形胚时期以及分化期。 我们应用微量生化分析技术以及放 射性同位素液体闪烁计数技术研究了玉米花粉胚状体发育过程的DNA,RNA,蛋白质含量及 合成动态，发现DNA,RNA和蛋白质含量在胚性细胞团期较高，然后下降，但到了分化期时 又有所升高。DNA合成速度在胜性细胞团时期较高，在以后的各时期降低并保持平稳c.RNA 和蛋白质的合成动态呈相似的变化规律。这个结果说明DNA,RNA和蛋白质在胚状体友育 早期的活跃代谢，可能与胚性细胞的快速分裂以及胚性结构的形成有关，而后期的活跃代谢可 能与胚状体的分化有关。 关键词：玉米，胚状体，DNA,RNA%蛋白质 胚状体发生的分子机制是组织培养中胚状体诱导工作的焦点之一。许多学者认为胚 伏体发生同植物合子胚发生具有相似的机制与途径，可以作为研究植物合子胚发生的良 好系统田，但由于缺乏使胚状体同步化的有效方法，这一工作难以开展。 我们用玉米花粉胚性细胞系做材料，采用无菌条件解剖镜下人工挑选不同发育时期 的胚状体作为同步化的方法，应用微量生化分析技术和放射性同位素液体闪烁计数技术 来研究DNA,RNA、蛋白质代谢与胚状体发育的相关性，从分子水平揭示胚状体发育的 规律，这不仅在理论上而且在实践上都具有重大意义。 材 料 与 方 法 继代培养的玉米 “八趟白”花粉胚性细胞系，经过长期继代培养与筛选获得一遗传性 状稳定的“八青”品系，在分化培养基上可以分化出大量正常的绿苗，分化培养基为2).N基‘ 本培养基＋1．Omg八KT＋1。Omg/1BA＋0.2mg/1IAA＋100mg/1肌醇＋500mg／1C ＋ 6%蔗搪＋0.2 活性炭+0.7%琼脂，pH5.65.8o 取一块生长均匀的颗粒状胚性愈伤组织接种到上述培养基上培养15天，培养条件为 15001ux，光照为每天 16小时，27土20C。在无菌条件的解剖镜下挑选不同发育时期的胚 状体，依形状与大小不同而分为：胚性细胞团、球形胚 直（径11O.1mm，每胚平均鲜重 0.667mg)、心形胚 长（1.5士。.2mm，宽1.2土0.2mm，平均鲜重1.142mg/胚）、梨形胚 长（ 本文于1988年12月26日收到。 1)现在工作单位：中国科学院植物研究所细胞室。 2)缩写：KT:徽动素；BA;卡基腺嗦吟；IAA;I31噪乙酸；CSI：水解酩蛋白；Ci;居里；F.W.,鲜重． 450 遗 传 学 报 17卷 2.2士0.2mm，宽1.5士0.2mm，平均鲜重1.538mg/胚）、子叶形胚 长（2.5士0.2mm,宽1.5士 0.2mm，平均鲜重2.118mg／胚）、分化期胚 长（3士。.5mm，宽2士。.2mm，平均鲜重4.Omg/ 胚）。 DNA,RNA、蛋白质的提取采用朱治平等的方法w0 总核酸浓度按Madison公式计算Eel［：总核酸浓度 m（g/ml)～0.0629D26。一0.0360 D2so(D2sa9D2a。分别为核酸提取物在1厘米光程的石英杯中比色时在260nm,280nm处的 紫外吸收值）。 DNA的测定按 Burton的二苯胺法”‘，RNA的量由总核酸减去 DNA的量得到。 蛋白质含量测定按 LowryE73法进行。 胚状体中的DNA,RNA、蛋白质分别用 ’H一胸腺咄吮核普 (20zlCi/ml，比度25.3 Ci/mmol，中国科学院上海原子核研究所）、3H一尿唾咤核昔 (201cCi/rnl，比度 15Ci/ mmol，中国科学院上海原子核研究所）、3H-亮氨酸 （1吵Ci/mol，比度 130Ci/mmol, 中国科学院上海原子核研究所）标记，标记液均用含有与分化培养基相同成分的