万花木内生真菌的化学成分研究.pdfVIP

福建武夷山 第九届全国药用真菌学术会议暨药用真菌专业组织成立三十周年庆 2009年10月 万花木内生真菌的化学成分研究 王爱国1，田晋1，一，马洁1，杨建波1，苏亚伦1，王伟2，吉腾飞1‘ (1．中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所， 北京100050；2．卫生部天然药物生物合成重点实验室，中国医学科学院＆j匕京协和医学院药物研究所， 北京100050；3．沈阳化工学院化学工程学院药物化学系，沈阳110142) bioica 摘要：目的研究从菊科植物万花木(MyripnoisBunge)中分得的内生真菌WFIM38的化学成分。 方法利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶SephadexLH-20和凝胶ToyopearlI胛-40C对万花木内生真菌删38 的乙酸乙酯部位进行化学成分分离；采用谱学方法对所得化学成分进行结构鉴定。结果从万花木内生真菌 w删38中分离得到化合物Brefeldina。结论BrefeldinA为首次从万花木内生真菌咖38中分得。同时该 内生真菌是BrefeldinA的高产菌株，产率达至U200。300mg几。 关键词：万花木；内生真菌；BrefeidinA 植物内生菌是一类研究开发少、次生代谢产物丰富、应用前景广的资源微生物。利用 植物内生菌资源，寻找新的活性次生代谢产物，已成为创新药物研究的热点之一。 bioica 万花木(MyripnoisBunge)为菊科蚂蚱腿子属(Myripnois)植物，全球仅有1种， 为我国特有植物：主要分布在我圈华北、东北、内蒙古一带，小灌木，局部形成优势群落， 是菊科植物在我国北方分布的唯一木本植物，民间用于清热解毒。对其化学成分研究很少， 且无内生真菌及其次生代谢产物和药理活性的研究报道。为明确万花木及其内生真菌的化学 成分，我们对其进行了初步的化学研究。 1 仪器与试剂 400型傅立叶变换红外光谱仪， XT．．100显微熔点测定仪(温度未校正)，NocoletImpact 1100系列LC／IⅥSD Inova-500型核磁共振波谱仪。薄层色 Agilent Trap．SP型质谱仪，Vairan 谱用硅胶GF254为青岛海洋化工厂出品，薄层用聚酰胺薄膜为浙江台州市路桥阴青生化材料 厂生产，分离用硅胶(140．160，200．300，硅胶H)均为青岛海洋化工厂出品，葡聚糖凝胶 HW-40C为三菱公司产品，显色剂为 SephadexLH．20为Pharmacia公司出品，凝胶Toyopearl 10％硫酸乙醇溶液，其他所用试剂均为分析纯。 2样品来源 样品采自河北省兴隆县南天门乡，由中国医学科学院北京协和医学院药物研究所马林 bioica 副研究员鉴定为菊科植物万花木(MyripnoisBunge)，标本存放于本实验室。 3万花木内生真菌的分离纯化 利用70％酒精浸5s，5％NaCl04浸5min，再用无菌水冲洗5遍对万花木的根、茎、侧 枝和果英进行表面消毒； 在消毒过的万花木根、茎和侧枝上分别取其表皮、韧皮部和木质部，在超净工作台上切 crux0．5 成约O．5 cm小片，包括果荚，分别置于马铃薯葡萄糖培养基(PDA)、Czapek培养基、 水琼酯培养基及万花木煎汁培养基平板上，在24～26C下避光培养。每隔12h进行观察，48h 后将长出的菌体转接在与之相同的培养基上，暗培养48h后进行纯化，采用划线和梯度稀释 两种方法反复纯化得到纯培养的菌株。 利用高氏l号、土豆、牛肉膏等三种培养基从万花木的根茎部分分离得到50株内生菌， 多为内牛真菌，少数为放线菌，没有进行种属鉴定。 4部分万花木内生真菌的发酵培养 选择性发酵培养了了其中的lO株，在土豆培养基中的生长状态如下表l。 通讯作者：’吉腾飞，博士，副研究员，TcI：010Fax：0i0E-Mail：jiff@imm．∞．∞