纳米金刚石作为中药活性成分胞内运输载体的研究.pdfVIP

关于举办“第二届中草药提取关键技术与提取物产业应用”研讨会 纳米金刚石作为中药活性成分胞内运输载体的 研究 李静1一诸颖1张小勇1’2李文新’黄庆1 1中国科学院上海应用物理研究所 2中国科学院研究生院 上海市嘉定区嘉罗公路2019号上海201800 L捅要] 目的：研究纳米金刚石(ND)作为多种中药活性成分有效载体的细胞内药物输运， 以及对药物细胞毒性的影响。方法：使用紫外一可见分光光度等技术研究了中药活性成分与纳米金刚 石的物理吸附效应，评估中药活性成分在金刚石上的吸附平衡时间和最大吸附量；用MTT法测定Hela 细胞分别暴露于纳米金刚石，单独的中药活性成分，以及纳米金刚石一中药复合物24小时的细胞存 活率；通过透射电镜观察细胞暴露于纳米金刚石，药物和纳米金刚石一药物24h后细胞形态变化。结 果：以羟基喜树碱为例，金刚石对羟基喜树碱的吸附在24h达到平衡，最人吸附量1．4pg／100“gND： 在Hela细胞存活率实验中，喜树碱组、纳米金刚石组、纳米金刚石一喜树碱复合物组的存活率分别 为：92．3％、106％、51．1％；透射电镜下观察喜树碱组、人参皂营Rbl组和纳米金刚石组细胞形态均 较正常，纳米金刚石组细胞胞质内可见较多纳米金刚_石存在，而喜树碱一纳米金刚石复合物组及人参 皂苷Rbl-金刚石组细胞胞膜均不完整，胞质内可见较大吞噬泡。结论：纳米金刚石能够明显增强中 药活性成分对Hela细胞的抑制作用，即使是没有明显抗癌活性的药物，当其吸附丁金刚石上并被带 入细胞后，也会表现出一定的抗癌活性，表明纳米金刚石是一种良好的肿瘤药物载体。 关键罕：纳米金刚石，药物载体，中药活性成分 碳纳米材料由于其独特的理化性质，近年来在纳米科学及纳米技术的发展中得到了广泛的关注。 常见的纳米碳材料有碳纳米管，纳米碳黑，纳米石墨烯等。目前已有不少关于这些材料的生物学应 用研究，比如说将其作为有机小分子或药物载体。卜5但是，上述这些材料都存在一个不容同避的 问题，那就是它们都不同程度的具有生物毒性。纳米金刚石是一类新型碳纳米材料。纳米金刚石独 特的物理性质、低化学反应性及较好的生物相容性，使其有可能成为优于其他碳纳米材料的药物载 体。蚋近期，纳米金刚石作为药物载体的研究还不是很多。在已有的研究中，盐酸阿霉素、4一羟基 他莫昔芬等已成为了纳米金刚石载带的目标药物，而将中药活性成分作为ND的目标药物的研究还未 见到。本工作即是研究纳米金刚石对儿种中药活性成分的胞内载药效应。 1材料与方法 1．1材料纳米金刚石，爆炸法产生，由兰州金石公司赠予：紫外一可见光谱仪(u一3010)：超生清 洗仪(SK8200H型)；细胞培养箱(Nuair，美国)；酶标仪(Bio—Rad680，美国)；离心机(Hitachi， 日本)；透射电子显微镜(JoelJEIl一1230)。 1．2方法 1．2．1将纳米金刚石与羟基喜树碱分散在水中并按10：1的浓度比例混合于EP管中，通过物理吸附 吸取上清液，用紫外分光光度计于喜树碱特征吸收峰380rim处检测，测得吸附后游离羟基喜树碱吸 光值，以相同浓度的喜树碱水溶液为对照，计算喜树碱在金刚石上的最大吸附量及最佳平衡时间， 绘制动力平衡曲线使用紫外一可见分光光度等技术研究了中药活性成分与纳米金刚石的物理吸附效 应m’11，测定了吸附动力曲线，评估中药活性成分在金刚石上的吸附平衡时间和最大吸附量： 1．2．2用细胞存活率实验评价金刚石一羟基喜树碱复合物的药效：将Hela细胞以每孔7×104个种于 88 关于举办“第二届中草药提取关键技术与提取物产业应用”研讨会 合物的DMEM全培养基，并将其加入24孔板相应孔中，同时设置喜树碱组、纳米金刚石组、空白对 活性成分，以及纳米金刚石一中药复合物24小时的细胞存活率，以评价纳米金刚石对药物药效的影 响； 1．2．3通过透射电镜观察细胞暴露于纳米金刚石、药物和纳米金刚石一药物24h后细胞形态变化； 2结果 2．1以羟基喜树碱为例，金刚石对其的吸附在24h达到平衡，吸附量1．4pg／lOOpgND； 碱组、纳米金刚石组、纳米金刚石一羟基喜树碱复合物组的存活率分别为：92．3％、106％、51．1％(见 附图)； 2．3透射电镜下观察羟基喜树碱组、人参皂苷Rbl组和纳米金刚石组细胞形态均较正常，纳米金刚 石组