枯草芽孢杆菌Bv22菌株产拮抗物质的条件研究.pdfVIP

研究论文 829 枯草芽孢杆菌Bv22菌株产拮抗物质的条件研究‘ 农倩林纬黄永禄袁高庆黎起秦” (广西大学农学院，南宁530005) subtilis 摘要：枯草芽孢杆菌BacillusBy22茵株是B11菌株经物理和化学诱变筛选得采 的变异菌株，对西瓜枯萎病菌有较强的抑制作用。本研究对枯草芽孢杆菌By22菌株产生括抗 物质所需的碳、氮、微量元素、pH值和温度进行测定，研究结果表a月在供试的7种碳源和6 种氮源中，最佳碳源为乳糖，最佳氮源为酵母膏，最佳微量元素为Mg；温度为35℃和初始 pH值为7．5时，产生的拮抗物质对西瓜枯萎病菌的抑制作用最强。芽孢杆菌By22菌株产生 拮抗物质所需的碳、氮、微量元素正交试验结果表明，乳糖、酵母膏和M92+在液体发酵培养 基中所占比例分别1％、l％和O．5％时，By22菌株产生拮抗物质的量最多，并且该拮抗物质 对西瓜枯萎病茵的抑茵活性较其他处理的抑菌活性强。 关键词：枯草芽孢杆茵；拮抗物质；发酵；抑茵活性 由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的西瓜枯萎病是一种毁灭性的土传病害【1]， 在世界各地的西瓜产区均有发生拉。。近年来，由于我国西瓜栽培面积扩大，重茬西瓜面 积增多，西瓜枯萎病发生越来越普遍和严重口J。目前对该病害的防治主要采用农业防治、 抗病育种、化学防治和生物防治等措施进行MJ，其中利用生物防治措施进行的防治即对 BacillussubtilisB11菌株进行物理和化学诱变后筛选得到的By22菌株对西瓜枯萎病病原菌 有明显的抑制作用∞J。芽孢杆菌产生生物防治效果的一个重要因素是其能产生拮抗物 质¨J。为利用Bv22菌株开发植物病害的生物农药防治西瓜枯萎病，我们对枯草芽孢杆菌 By22菌株产生拮抗物质所需的碳、氮、微量元素、pH值和温度进行测定，以探明该菌株 最适合产生拮抗物质的条件。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1供试菌株 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)By22菌株、西瓜枯萎病菌(Fusarumoxysporum)均 由广西大学植病研究室提供。 1．1．2供试培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和牛肉膏蛋白胨培养基(NA)的配方参照方中达 ·基金项目：广西壮族自治区自然科学基金资助项目(桂科基0009018) 第一作者：农倩(1985一)，女．广西大学硕士生；E—mail：nongqian@126．com gxu．edu．cn 植物保护科技创新与发展 (1998)旧1；碳源利用基础培养基和氮源利用基础培养基的配方参照东秀珠和蔡妙英 0．02％MgS04·7H20，0．01％CaCl2·2H20。 1．2方法 1．2．1供试菌株的培养 1．2．1．1细菌的活化 养基上进行纯化培养，备用。 1．2．1．2真菌的活化 将西瓜枯萎病菌于PDA固体培养基上，置于28℃下培养，长出菌丝长后，移小块于 PDA培养基上，置于28。C下培养7天，备用。 1．2．2菌株拮抗物质的提取 取枯草芽孢杆菌By22菌株的发酵液lOml，于5 酸铵至70％饱和度，置于4cC下静置12h，于5000rpm离心15min收集沉淀后称其重量， 用无菌水稀释10倍制成拮抗物质液。 1．2．3 菌株拮抗物质抑茵圈的测定 用琼脂扩散抑菌圈法测定Bv22菌株产生的拮抗物质对西瓜枯萎病病原菌的拮抗作用。 孔中，在30℃下，2天后测量抑菌圈的大小。 1．2．4影响Bv22菌株产生拮抗物质的营养条件的测定 By22菌株在50ml的NA培养液中，30。C下培养2天，将培养液于5000rpm离心 菌体悬浮液，备用。 1．2．4．1不同碳氮源对Bv22菌株产生拮抗物质的影响 测试的C源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、D一果糖、甘露醇和可溶性淀粉；N源有牛肉 浸膏、酵母膏、大豆蛋白胨、硝酸铵、氯化铵和硝酸钾。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、D·果 糖、甘露醇用细菌过滤器灭菌。C源和N源在基础培养基中的终浓度为1％。每种碳氮源 培养液分别接种1m