人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白复性过程中研究的影响因素.pdfVIP

中国兽医学报 2009年7月 第29卷 第7期 ChinJVetSciJu1．2009 Vo1．29 No．7 905 人工分子伴侣系统辅助鸡 IL-18重组蛋白复性过程中研究的影响因素 王新华 ，胡敬东，孔 娜，李宏梅，赵宏坤 (山东农业大学 动物科技学院动物传染病实验室，山东 泰安 271O18) 摘要：将重组原核表达质粒pGEX-mChIL一18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)，并用IPTG于37℃诱导培养获得 表达。表达的包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol／L的盐酸胍溶解，使蛋 白彻底变性。然后按照试验设计，考察 不同浓度组成的人工分子伴侣体系对不 同浓度鸡 IL_l8重组蛋 白复性率 的影响。试验结果表 明，利用人工分子伴 侣系统辅助鸡 IL_18重组蛋 白的复性存在最佳的条件，优化该条件能够提高该融合蛋 白的复性率，且产物都具有 良 好 的生物学活性，为鸡 IL一18重组蛋 白的进一步应用研究奠定了基础 。 关键词 ：人工分子伴侣系统；鸡 IL厂18重组蛋白；复性 ；复性率 中图分类号 ：R392．11 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4545(2009)07—0905-04 Influencingfactorsintherefoldingprocessofartificialmolecularchaperoneassis— tingchicken IL一18recombinationprotein ’ WANGXin—hua，HUJing—dong，KONGNa，LIHong—mei，ZHA0Hong—kun (CollegeofAnimal Scienceand Veterinary M edicine，Shandong Agricultural University， ’an，Shandong 271018，China) Abstract：Therecombinantplasmid ofmChiL-18 prokaryoticexpressionwastransformed into E．coliBL21 (DE3)strainandtheninducedbyIPTG at37℃ ．Aftercrushedandwashed，theexpressinginclusionbodieswere thoroughlydenaturedwith6mol／L guanidinehydrochloride．Thenaccordingtoexperimentdesign，theeffectsof rChlL-18proteinrefoldingyieldatdifferentdensitieswereinvestigatedbythesystemsofartificialchaperoneatdif— ferentdensities．ExperimentresultsindicatethatthereisaoptimalconditionOnassitingrChIL-18proteinbyusing theartificialchaperonetechnique．Theoptimalconditioncan improvetherefolding yieldofrChIL-18 protein，and thentheexpressedproductoffusionchicken IL-18geneinE colihasarelativityhighbioaetivity． Keywords：artificialmolecularchaperone；chickenIL一18recombinationprotein；refolding；refoldingyield * Correspondingauthor 白细胞介素 18(interleukin一18，IL-18)也称为 7 杆菌中是以包涵体的形式高效表达 ，但 由于包涵体 干扰素(IFN一7)诱导因子(interferon 一inducingfac— 是无活性固体颗粒，所 以必须经过蛋 白质复性使其 tor，IGIF)，是 Okamura等 首次从小 鼠肝脏 中克