八肽胆囊收缩素致急性胰腺炎体外模型的建立及其研究.pdfVIP

医学2009年 12月第29卷第 121~ ChinJCritCareMed,Dec．2009,Vo1．29,No．12 八肽胆囊收缩素致急性胰腺炎体外模型的建立 及其研究 黄 刚， 汤为学， 陶小红 作者单位 ：400016 重庆 ，重庆医科大学附属第一医院消化内科 作者简介：黄 刚(1973一)，男，主治医师，硕士研究生。 通讯作者：陶小红 (1957一)，教授 ，消化内科主任。 [摘要] 目的 用CCK一8建立体外急性胰腺炎模型，并在模型中观察胰腺腺泡细胞淀粉 酶、胰蛋白酶活性及F—actin的分布变化。方法 用胶原酶分离的胰腺腺泡细胞体外培养，设不 同浓度的CCK一8组(10 ～10 mol／L)和对照组，CCK一8刺激30min后 ，用淀粉酶、胰蛋白酶 试剂盒检测腺泡细胞淀粉酶、胰蛋白酶活性，用激光共聚焦显微镜观察细胞内F—actin分布的变 化。结果 CK一8诱导的淀粉酶分泌率呈双峰曲线，低浓度CCK一8组 (10 ～l0 。mol／L)，淀 粉酶分泌率呈剂量依赖，高浓度CCK一8组 (10一mol／L、10 mol／L)，淀粉酶分泌被抑制；lO mol／LCCK一8时，细胞 内胰蛋白酶活性明显升高 (P0．05)，10 mol／L后升高更为急剧；CCK一 8刺激浓度达 10 mol／L后，细胞内F—actin出现重新分布，近细胞顶部区域／细胞基底部侧面的 比值与对照组比较 ，出现显著改变(尸0。05)。结论 成功建立了体外AP模型，CCK一8刺激可 使胰腺腺泡细胞内F—actin分布从顶部向胞浆部、基底部变化，抑制了细胞消化酶分泌，并与腺泡 细胞内胰蛋 白酶的过早激活相关。 [关键词] 急性胰腺炎； 胆囊收缩素； 胰蛋白酶 [中图分类号] R576 [文献标识码] A [文章编号] 11302—1949(2009)12—1101—04 doi：10．3969／j．issn．1o02—1949．2009．12．013 Seeretagoguesacutepanereatitisin pancreaticacinarcellinduced by cholecystokinin HUANG ， TANGWei—xue。ATOXiao—hong．DepartmentofGastroenterology，theFirstAffiliatedHospital ofChongqingUniversityofMedicalSciences。Chongqing400016，China [Abstract] Objective Thecholecystokinin—octapeptide(CCK一8)wasusedintheestablish— mentofthemodelofacutepancreatitisinpancreaticacinarcells，andthechangesofamylase，trypsin activityandtheredistributionofcytoskeletoninacinarcellswasobserved．Methods Isolatedpancreatic aciniwerepreparedfrom ratpancreasesbydigestionwithcollagenase．Aciniwerestructurallysimilarto thoseofthe intactpancreasand incubated in themedium with deferentconcentrationsofCCK 一8 (10 一10 mol／L)for30minuteswithsalineasacontro1．Amylaseandtrypsinactivityweremeas— uredusingassaykits，F—aetindistributioninpancreaticacinarcellsweredetectedbylasereonfocalmi— croscopy．Results CCK一8generatedabiphasicsecretiondose—responsecurveinwhichtheamylase secretionincreasedwiththelowconcentrationsofCCK一8(10I1～lO 。mel／L)。andinhibitedwith thehighconcentrations(10一mol／Land10一mol／L)．Theintraeellulraact