Survivin-2B在肿瘤细胞凋亡过程中的作用研究.pdfVIP

中国医药生物技术 2009年 12月第4卷第6期 ChinMedBiotechnol，December2009，Vo1．4，No．6 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673—713X．2009．06．007 · 论 著 · Survivin一2B在肿瘤细胞凋亡过程中的 作用研究 邵红伟，张文峰，胡青莲，黄树林 【摘要 】 在肿瘤的发展过程 中起着非常重要的作用 。那么 目的 探讨肿瘤细胞凋亡过程中 survivin一2B 的作用机制。 survivin一2B是如何丢失了 lAP家族的抗凋亡活性 方法 通过流式细胞仪分析 survivin一2B对肿瘤细胞周期的 的?它在肿瘤的发生发展中起着什么样 的作用? 影响；利用激光共聚焦显微镜观察通过青色荧光蛋白(CFP) 这些问题成为众多学者关注的焦点。有研究指出 标记的 survivin一2B和罗丹明 123标记的线粒体在细胞 内 survivin一2B与线粒体密切相关，并推断其可能定位 的定位及在细胞凋亡过程中的变化；采用荧光共振能量转移 在线粒体上通过阻断其他抗凋亡因子的活性而发 (fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)方法分析 挥作用u引。据此，本文试图通过检测 survivin．2B对 survivin一2B和 survivin—AEx3在细胞 内的相互作用 。 细胞周期 的影响，采用荧光标记研究 survivin．2B 与线粒体的共定位，以及它在凋亡过程中的变化与 结果 流式细胞仪分析结果表 明，Survivin一2B 能够明显抑 线粒体的相关性，同时利用荧光共振能量转移 制肿瘤细胞生长，促使细胞凋亡增加；通过激光共聚焦显微 镜观察到凋亡早期 survivin一2B 聚集在细胞发生固缩的部 (fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)方 法初步探讨 survivin．2B 的作用机制。希望能够进 位，且在肿瘤凋亡过程中不存在明显的线粒体定位及与线粒 一 步了解 survivin一2B在肿瘤发生发展 中的作用机 体 的相关性 ；FRET 分析显示 survivin一2B 与 survivin— 制。 AEx3在细胞质中存在很弱的相互作用。 结论 Survivin一2B 能够 明显促 进肿瘤 细胞 凋亡 ，且 1 材料与方法 survivin一2B 通过与 survivin—AEx3直接结合 以阻断其抗凋 1．1 主要试剂和仪器 亡效应的可能性较小。 细胞株 HeLa、E．coliDH5a、载体 pCDNA3．1(．)、 【关键词】 细胞凋亡； 线粒体； 荧光共振能量转移 编码青色荧光蛋 白 (enhanced cyanfluorescent www．cmbpnet．cn 中国医药生物技术 2009,4(6)：436—440 protein，ECFP)和黄色荧光蛋白 (enhancedyellow fluorescentprotein，EYFP)的开放读码框 (ORF) Survivin 作为凋亡抑制蛋 白 (inhibitorof