环介导等温核酸扩增技术快速检测产毒亚历山大藻.pdfVIP

维普资讯 现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2007，Vo1．23，No．11 环介导等温核酸扩增技术快速检测产毒亚历山大藻 刘芳，王丽，李琳，山崎伸二，石磊 (华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640) 摘要：DNA~g介导等温扩增 (LAMP)方法是一种新型的核酸扩增技术，该方法是在等温的条件下进行的，具有反应时间短、灵 敏度高、特异性强的特点。本文以产麻痹性贝毒 (PSP)的亚历山大藻为研究对象，采用简易法提取DNA模板，设计特异t~·LAMP I 物，利用LAMP技术进行产毒藻种的快速检测，同时，着重对LAMP技术与PcR技术在检测微小亚历山大藻细胞的灵敏度方面做了比 较。向LAMP终产物 ha~SYt3RGreenI染料后可直接用肉眼观察结果而不需要通过凝胶电泳来观察。结果表明，LAMP~术在恒温 65℃，lh内就可以检测到产毒藻种；LAMP技术检测微小亚历山大藻的最低检测限为200-~m／l，而PcR技术的最低检测限为1000~m／l， LAMP扩增方法比PcR扩增方法的程序简单、反应时间短、灵敏度高；LAMP技术不需要精密的温度循环装置，有恒温加热设备就可 以满足检测务件，可用于野外检测。 关键词：环介导等温核酸扩增技术(LAMP)；亚历山大藻：快速检测 中图分类号：TS201．6；文献标识码：A：文章篇号：1673．9078(2007)11-0071．04 RapidDetecti0n0ftoxicAlexandrium byLoop．M ediatedIsothermal AmplificationM ethod LIUFang，WANGLi,LILin，ShinjiYamasaki，SHILei (CollegeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640，China) Abstract：Loop-mediatedisothermalamplificationmethod(LAMP)isanovelnucleicacidamplificationtechnology．TheLAMPmethod amplifiesDNAwithrapidity，highspecificityandsensitivityunderisothemralconditions．ThisthesistooktoxicAlexandriumasthemajor researchobject．DNAtemplatewasextractedbyboilingmethodnadspecificprimerwasdesignedforLAMPassays．ToxicAlexandriumwere quicklydetectedby LAMPtechnology．LAMP nadPCR weresuccessfullycomparedinthesensitivityofdetectingAlexandrium minutum． Withoutgelelecrtophoresis，theLAMPamplificationwasdirectlyvisualizedinthereactiontubebyadditionofSYBRGreenIforanaked-eye inspection．Th eresultindicatedthattoxicAlexandriumwasdetectedbyLAMPtechnologywithin1hun derisothemr alconditionat65℃．Th e lowerdetcetionlimitoftheLAMPreactionwas200cell／ml，whilethatofthePCRWas 1000cell／m1．Th eLAMPassayismoresimple，rapid na dsensitivethna thePCR．Furthemr