阿尔茨海默氏症致病蛋白-Aβ（12-28）肽段的NMR研究.pdfVIP

波 谱 学 杂 志 第 26卷第 4期 V01．26No．4 2009年 12月 ChineseJournalofMagneticResonance Dec．2009 文章编号：1000—4556(2009J04—0492—05 阿尔茨海默氏症致病蛋 白一 (12) 肽段的NMR研究 施燕红，姜春懿，徐松林，刘东祥，宋国强 (中国科学 院 上海药物研究所 ，上海 201203) 摘 要：郫 肽的多聚化和纤维化在阿尔茨海默 氏症 (Alzheimersdiseas)的发生中起关键作 用 ，其 中以 邮 的致病作用为最强，因此阻断其聚集成为阿尔茨海默氏症一种潜在的治疗 方式．作者在研究中发现某些化合物可以结合于 s肽段 ．该文采用 H—HCOSY、TOC— SY、ROESY和 “N-HSQC多种核磁分析方法 ，对此肽段 的 H和 “NNMR谱信号进行 了归属 和详细分析，为进一步研究其与小分子抑制剂的相互作用提供了基础． 关键词 ：核磁共振(NMR)；信号归属 ；2DNMR谱 ；A晟12 肽段 中图分类号 ：0482．53 文献标识码 ：A 引言 阿尔茨海默 氏症是一种复杂的退行性神经病变，通常在老年人群 中发作 ，主要症状 为记忆和认知能力的逐渐丧失．研究表明A 肽的多聚化和纤维化在疾病 的发展过程中 起重要作用 1【]，因此抑制 A 肽多聚化和纤维化成为阿尔茨海默氏症一种潜在的治疗方 式．其中A ¨∞和 A 是 2个最主要的致病性多肽 ，后者的致病作用更强 2【]．目前 已经发现有很多化合物不但可以抑制 A 的聚集，还可 以使 已经发生聚集 的A 解聚．某些化合物能够结合于Ap 瑚，肽段 ]，但是具体的作用位点和作用机理尚不清 楚．本文利用多种核磁技术 ，对 A晟 肽段 的 H和 ¨NNMR谱信号进行了归属和详细 分析 ，为进一步研究其与小分子化合物的相互作用提供了基础． 收稿 日期 ：2009—06—01；收修改稿 日期 ：2009—07—17 作者简介 ：施燕红 (1977一)，女，浙江绍兴人，博士，从事药物分析专业． *通讯联系人：宋 国强，电话 ：021 3119，E—mail：gqsong@mail．shone．ac．cn． 第 4期 施燕红等：阿尔茨海默氏症致病蛋 白一Ap zs，肽段的NMR研究 493 1 实验部分 1．1 样品制备 A ，肽段的一级序列为：VHHQKLVFFAEDVGSNK，采用多肽 固相合成 的方 法合成．先将多肽样品溶于六氟乙醇中，超声处理 30min后 ，将溶液旋转蒸发干燥 ，最 后把多肽样品溶于 300uLDMSO的shigemi管中，终浓度为 3mmol／L． 1．2 实验 所有的NMR实验均在配备有 Z轴梯度场 的三共振反 向检测探头的VarianUnity Inova600核磁共振谱仪进行数据采集，记录的NMR谱主要包括 H一H COSY、TOC— SY、ROESY和 N—HSQC谱 ，实验温度为297K．H 的化学位移以DMSO为内标，¨N 的化学位移 DSS为基准 ]． COSY和TOCsY(f．为 80ms)中谱宽为 5996Hz，ROESY(￡…为 200ms)中谱宽 为 9596Hz，采样点数均为 2048×256，处理时加正弦窗函数后冲零至 4096x4096； N—HSQC中F (H)维谱宽为 10000Hz，F (N)维谱宽为 1000Hz，采样 点数为 2048×64，考虑到 N的天然丰度 ，每个 t。增量采用 120次累加 ，处理时加正弦窗函数 后冲零至 4096×1024．所有数据使用 NMRPipe软件包l7]处理 ，处理后 的谱 图用 SPARKY_8进行分析． 图 1 A 1228)肽段的 TOCSY图(混合时间为 8Oms，297