用乳腺上皮细胞生产人乳铁蛋白转基因克隆羊的研究.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论鲁论文集 用乳腺上皮细胞生产人乳铁蛋白转基因克隆羊的研究 尝}围，J垃勇，丁同粱，安礼直，赵俊辉，许K娟 扬州k学*K学院舡苏省转丛【N动物制药I棒研究巾o+扬州225009 关键词转犟因：按移植乳腺上应细胞：人乳铁蛋白；山羊 引言 目内外普遍采用腑儿戚2f维细胞作为生，“转摧【目克降动物的供作细胞。但}|响闰内外还没有用转毕闻乳 腺I．皮鲥胞作供核细胞获得克旌I的报道，儿重构胚的荻疗能力证不衍楚。 材料与方法 1)，电转染对数 川s“f，和Not『以酶州pBLCl4质}t获得线化人乳铣出r1乳腺特异性嵌选载体‘H 期tlJ羊乳腺j应细胞。G418筛选的执性细胞株托培养液中加^催乳亲f5uM)爵导人乳铁蛋【_f的表达，48h后 收燕培养液进行SDS．PAGE电泳和Westernblot椅删。收集经过诱导的细胞，提取DNA进打PCR榆删．皮 h，1梭辖植而2 细胞培养至80％汇台扁+舟05％FCS培养液c}，饥饿48 h收坐+埘M2硅浮细胞备川明母 KV／em、40 融台．条件为21 u～、2个脉冲。融合卵枉M16i1培养5 6DMAP和7．5 h，然Ji移^M16中觚暂培养肝穆入目步发情受体的输卵铤内。在 LI∥lnLcB的M16。培养5 的方法，扩增【|下MHCII类DRB坫刚第2外丝r。 IL{- t～l、 m、^ 、n 】n自1h M} nE —— “¨。 l“)l}bp 一I一—■■■■■■■■—H■■-——一 H}nBIC／4砩扎‘u—x州．H 、fI 结果 如丧1所示，北融舍156枝巫构肛，融台车为647％，触活后的1“枝重构肌瓶暂培养后移八】6只例步 5％ 敷情受悼输卵箭1-，在移}^后的30天、60天和90天进行B超诊断，妊娠率分别为875％、813％和62 3jl受体¨娠足』】生F3只克隆革，产羔半为i88％，共4只受倬0：怀孕过辉中#【产，其中2只流产胎儿表现 为肝肿大。采用PCR+RFLP的古法分析表明．克隆t条柬自于供接羊细胞。 表1 乳腺上皮细胞核移植胚胎发育结果 讨论与结论 奉实骑以表达人}：铁蛋白的转牡lN乳腺r皮细胞系进行核移世．其牛产，3』l克隆f，重掏胚的触音卓 (64 选帕条什r，能僳持筻育的幸能性，为应川乳腺r皮细胞牛产转萆lN克隆动物提供r一定的宴崆依据．在挑 选兜隆时很难获得高瞳纯化的转基因细胞．他得托转蟮冈克降中，利刖抗悱细胞牛产的克隆动物并非全部整 音外源基Ⅲ。在本实骑过程q一也存在H样的情况，出生的3H兜隆羊没有检洲到外源基囡。总之，奉宴骑表 明I】t羊乳隙上皮细胞经过长期培养筛选后．自E慊持垃肯争能性，Ⅱ眶掏胚的融台章、环孕率和克降效宰部较 ¨．r町_山转坫刚动物q产提供咒神供体细胞选择， 致谢 水项U世转琏目前^0项高产优质转簟吲奶牛鞒*种培肯”(批准与：2008ZX08008．004)资助。