正十六烷微生物降解酶的定域和酶促降解性的研究.pdfVIP

第四届全国环境化学学术大会论文集(上册) 正十六烷微生物降解酶的定域和酶促降解性的研究 陈延君，王红旗+，熊樱，云影 (北京师范大学水科学研究院，水沙科学教育部重点实验室，北京，100875) 摘要 以正十六烷为研究对象，通过室内实验，利用细胞静息技术提取了2株菌的胞外、膜周以及膜内酶，对水体 中石油烃类污染物的微生物降解酶定域，并研究了菌株受环境影响的产酶条件和酶的一般性质．结果发现：蜡状芽孢 杆菌DQ01能降解正十六烷的关键酶位于膜周和膜内，芽孢杆菌DQ02降解正十六烷的关键酶是胞外酶和膜内酶．通 过GC．MS对代谢产物的测定发现关键酶对十六烷的代谢途径是常见的单末端氧化．2株菌产酶的最佳环境条件是： 酶的活性最高．酶降解性的最适温度是30℃． 关键词 微生物；酶促降解；正十六烷；静息细胞技术 0 引言 微生物控制污染技术近年来逐渐受到重视，并在污染水域和土壤修复等领域得到广泛应用。为了 科学指导污染水体和土壤的修复工程，有效提高微生物降解有机污染物的效率，需要迸一步充分研 究微生物技术去除水中有机污染物的微观原理和规律性，尤其是分解代谢石油烃的微生物酶的情况。 微生物细胞降解石油烃的核心过程是微生物的酶与微生物发生了酶促反应，胞内酶可以氧化烷烃， 白腐真菌产生的胞外酶可以降解污染物。可见，微生物的膜内酶和胞外酶可能都与污染物的降解过 程有关，因此，本文以正十六烷为研究对象，通过室内实验对石油烃类污染物的微生物降解酶定域， 并研究了影响因素不同时微生物菌群应激产酶降解石油烃的差异以及酶的一般特性：为更好地提高 水体和土壤环境中石油烃类污染物的微生物降解效率提供理论依据和技术支持。 1材料与方法 1．1主要试剂和仪器 细胞粉碎机(宁波新芝公司)． 1．2实验方法 (1)菌种的培养和降解实验 实验用微生物是从大庆油田石油污染土壤中分离出的优势菌种，用16sRNA鉴定为蜡状芽孢杆 cereus 菌DQ01(BacillusDQOI)和芽孢杆菌DQ02(Bacillus sp．DQ02)． 降解实验正十六烷的初始浓度为10mg／L和100mg／L：采用超声萃取的方法提取培养液中的正十 六烷。 (2)降解酶的定位 挑取降解菌的单菌落，加入到装有正十六烷培养基的试管中，在30℃下，以150r／min恒温振荡 培养至对数生长期．另以葡萄糖为碳源培养菌株，培养至对数生长期．采用静息细胞技术分步提取降 解酶．比较胞外，膜周，膜内提取液的降解能力．另以相同的方法提取并测定以葡萄糖为碳源的菌体 胞内酶、胞外及胞周酶对正十六烷的降解情况作对照． (3)环境因素对产酶的影响 在培养微生物时加入不同浓度的鼠李糖脂(O．1，O．2，0．4，1，2，4 mmol／L)，在30℃下，以 150r／min恒温振荡培养至对数生长期，用静息细胞技术提取酶，测其对正十六烷的降解率． (4)pH和温度对酶促降解性的影响 2】9 第四届全国环境化学学术大会论文集《卜册) 40℃时对正十六烷的降解情况． 2结果与讨论 2．1菌种对正十六烷的降解率 cereus DQ0])和芽孢杆菌DQ02(Bacillussp．DQ02)对正十六烷 蜡状芽孢杆菌DQOI(Bacillus 的降解情况如图1所示，7d后2株菌对10mg／L的正十六烷降解率都达到99％，蜡状芽孢杆菌DQ01 和芽孢杆菌DQ02对100mg／L的正己烷的降解率达到59％和69％，说明2株菌对正十六烷有很好的 降解能力． 2．2降解酶的定域 蜡状芽孢杆菌DQ01不同部位的酶对正十六烷的降解能力不同，胞外酶对正十六烷的降解率不 及50％，膜周酶对正十六烷的降解率达到86％，膜内酶的降解能力最强，达到100％，蜡状芽孢杆 菌DQ01的降解酶主要定域于膜周和膜内．芽孢杆菌DQ02胞外和膜内酶对正十六烷的降解均是100 ％，而膜周酶对正十六烷没有降解能力，因此DQ02的降解酶主要定域为膜内和