蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞保护作用的研究.pdfVIP

相近，可能与样本量、研究对象不同、用药依从性不确定及评价方法不一致等其他因素有关。 参考文献略 蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞保护作用的研究 杨思进杨云芳 白雪 罗钢 泸州医学院附属中医医院心脑病科泸州 646000 摘要：目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与蛋白酶激活受体．1(PAR．1)表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊 的干预作用，探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶 囊低、中、高剂量组。采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型。采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达，免疫组化法测 定PAR．1蛋白的表达。结果与模型组比较，蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR．1表达均明显 下降，差异有统计学意义(P0．01)。与低剂量组比较，中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-l表达均明显下 降，差异有统计学意义(P0．01)。结论蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR．1活化，减少细胞凋亡，对脑出血大 鼠具有明显的脑保护作用，且存在一定量效关系。 脑出血是神经系统常见疾病，其发病率、病死率、致残率高，给社会和家庭带来沉重负担。研 究证实脑出血最重要的病理改变是血肿本身及其引发的继发性损伤【l】。本实验通过动态观察大鼠脑 出血后神经细胞凋亡和PAR-1的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用，探讨蛭龙活血通瘀胶囊 可能的脑保护作用。 1 材料与方法 1．1 实验动物与药品健康雄性成年清洁级SD大鼠，体重2509一3009，由泸州医学院动物实验 中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK01[)2008．065。蛭龙活血通瘀胶囊：主要由黄芪、水蛭、 地龙、大血藤、桂枝等组成，每粒0．49(相当于生药2．69)，由泸州医学院附属中医院制剂室提供，批 号专利号：200810147774．1。 1．2动物分组与药物干预将100只大鼠随机分为5组，即蛭龙活血通瘀胶囊离剂量组(简称 “高剂量组”)、蛭龙活血通瘀胶囊中剂量组(简称“中剂量组”)、蛭龙活血通瘀胶囊低剂量组 (简称“低剂量组”)、脑出血模型组(简称“模型组”)和假手术组。每组各20只。每组按术后 不同时间各分为6h、ld、3d、7d共4个亚组，每亚组5只。均于术前7d开始给药．每天一次。低、 中、高剂量组大鼠均给予等体积(3mi)相应浓度的药物灌胃，用药量分别为0．49／kg／d、0．8眺g／d、 1．69／kg／d；假手术组及模型组大鼠给予等体积(3m1)的生理盐水灌胃。 1．3 戊巴比妥钠，按45mg／kg腹腔注射麻醉，俯卧位固定于鼠脑立体定位仪上。常规备皮消毒，沿头皮 正中做一长约Icm的纵切口．双氧水剥蚀骨膜，暴露前囱。于前囟前0．5mm，中线右侧旁开3ram 的速度匀速将大鼠自体尾部血液50u．1注入尼壳核内，注血结束留针15分钟后缓慢退针，骨蜡封闭 针孔，缝合切口，消毒预防感染。假手术组以O．9％生理盐水501al代替自体血，余操作同模型组。 5分制法【5】进行神经功能缺损评分：0 1．‘；造模成功标准待大鼠术毕清醒后，参照ZeaLonga 分无神经功能缺损症状；1分提尾倒挂时左前肢紧贴胸壁不能伸展；2分行走时向左侧转圈；3 分行走或站立时向左侧倾倒；4分意识障碍，不能行走。1---3分者为模型成功。各组大鼠每天进 行1次神经功能缺损评分。 1．5观察指标与方法 1．5．1标本采集分别于术后6h、1d、3d和7d，每组随机取5只大鼠，过量麻醉后，固定于简 易手术台上，迅速开胸，暴露心脏，用接有输液器磨钝的10号针头与心尖左缘成450向上进针，插 入心腔并送至主动脉起始部(动作轻柔，防止戳破主动脉)，固定针头，迅速剪开右心耳，快速滴 先在5分钟内滴入100ml，余液在25分钟内缓慢滴爿引，可见大鼠四肢及颈部明显僵硬，开颅取脑， 以注射针道为中心，冠状切取针道前2mm至针道后2mm脑组织，放入福尔马林溶液中浸泡固定， 以备TUNEL染色和免疫组化染色。 1．5．2 TUNEL染色检测细胞凋亡凋亡细胞染色具体操作按试剂盒说明书进行。凋亡细胞的细 胞核呈棕黄色着染。 1．5．3免疫组化染色检测PAR-l蛋白将切片置60。C恒温烤箱中烘烤30分钟。石蜡切片，梯度 脱蜡、脱水，3％H202室温孵育10分钟，蒸馏水洗3次，每次5分钟，微波抗原修复，血清封闭。 微镜下