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高效液相色谱法测定食品中的维生素D 张燕婉 王津生 （中国肉类食品研究中心 北京 100075） 最普遍使用的方法是先用乙醇-氢氧化钾溶液 1前言 将样品皂化，然后用有机溶剂萃取其中的非皂化物。 在皂化过程中应控制条件，避免过热引起的组分异 维生素D（Vit.D）在人体骨胳组织矿化代谢过 构化。又由于Vit.D在空气中易氧化分解，在食物样 程中起着十分重要的作用，它不仅促进钙与磷在肠 品中含量较低，皂化时可加入一些抗氧化剂以阻止 道的吸收，而且也作用于骨质组织，促进钙磷最终形 氧化。为避免皂化带来的问题，有人曾采用过夜冷皂 成骨质的基本结构。当Vit.D缺乏时，会导致人体患 化（或萃取前不皂化的办法（3） 佝偻病和软骨病等。Vit.D是一群结构类似的类固 纯化是Vit.D预处理方法中关键的一步，处理 醇的衍生物。目前的研究已经表明，化学上已有十多 种类固醇具有Vit.D的生理活性，但其中最重要的 不当会产生大量的聚合物。当然也有像Agarwal 是Vit.D3（胆钙化醇）和Vit.D2麦角钙化醇）以及 等（7）那样，不进行纯化，而是采用样品与三氯化锑 它们的代谢产物（如1,25-(OH)2-D3,25-OH-D3)。 （SbCl3）反应，使强化牛奶中存在于非皂化物中的维 生素，转变为等规聚合物（isotachysteols），这种衍生 物能够在301nm波长处被测到，且不受其它物质的 干扰。纯化的方法随食品的原料和种类而有所不同。 例如，对于强化的鲜牛奶和奶粉，在进行HPLC分 析之前，可用半制备型的氰基键合相色谱柱进行提 纯；而对于饲料样品需要采用两步提纯：即先用氧化 铝（Al2）的色谱柱将Vit.D与Vit.E、胡萝卜素分 开，再用RP-18半制备柱进行Vit.D的纯化。Vil- 目前测定维生素D的方法主要有高效液相色 lalobos等（）和Romanov等（9）也都用氧化铝色谱柱 谱法（HPLC），薄层色谱法（TLC）和气相色谱法 提纯玉米片、沙丁鱼和植物中的Vit.D。Bekhof （GC）。在过去的几年里，虽然曾用开管柱、TLC法 等（11采用两步梯度HPLC系统，在氰基键合相上进 和GC法进行Vit.D的分析，但近五年里这几种方 行纯化，将氰基柱直接连在分析柱的六通阀上。制备 法没能得到进一步的发展。相反，HPLC法分析Vit. 型RP-18液相色谱柱多用于婴儿食品和蘑菇中 D在近十年里经过持续不断的研究，得到了很大的 Vit.D的分离；Laffi（0，用RP-8柱提纯饲料中的 发展，已成为目前测定机体中生物活性很小的Vit. Vit.D。Takamura等（）则先用TLC粗分离蘑菇中的 D含量的最有效和最普遍的分析方法。V