高效液相色谱法研究氨基酸测定中鸡蛋样品的微波水解96812.pdfVIP

高效液相色谱法研究氨基酸测定中鸡蛋样品的微波水解 尚素芬 王 洪 河（北大学化学系 保定 071002） 提 要 利用Pico-Tag高效液相色谱法H（PLC）研究了氨基酸分析中一种新的水解方法— 微波水解法，鸡蛋 样品以内含1％苯酚的6mol/L盐酸作为水解液水解，仅需7min即可水解完全，平均回收率为 95％，相对标准 偏差小于 2％ァ。方法简便、快速、准确、重现性好，适用于不同样品的水解处理。 关键词 高效液相色谱法，微波水解，鸡蛋，氨基酸 分类号 O658/Q51 5mL容量瓶中。取此溶液20μ蘈L于样品管底部，置于 1前言 Pico-Tag工作台上抽真空干燥和衍生，最后取10μL 对蛋白质中氨基酸的分析使用最早最为广泛的 进样，用Pico-Tag氨基酸分析法2（）分析，以峰面积 是经典水解方法1（），随着Waters公司Pico-Tag氨 定量 。 基酸分析法2（）的提出，便利用Pico-Tag工作台进行 3结果与讨论 水解，但水解时间仍与经典法相同。1975年有人3（） 提出用微波炉改进酸消化技术，进而使微波技术逐 3.1水解液的选择 渐应用于不同类型化合物的样品水解和色谱分 酸度的影响 分别以3,6,9,12mol/L盐酸作 析4（）。 为样品水解液，在相同条件下，以6mol/L盐酸水解 本文将微波技术应用于鸡蛋的水解并用HPLC 效果为最佳。 法测定水解氨基酸含量，取得了满意效果。 苯酚的影响 由表1可见，向水解液中加入苯 酚可提高酪氨酸、组氨酸等的重现性，苯酚加入量为 2 实验部分 1％时效果最佳。 2.1 主要仪器与试剂 Waters高效液相色谱仪 包（括510泵，810数据 库，M441紫外吸收检测器），Pico-Tag工作台，水解 氨基酸分析专用柱 （150mm×3.9mm,C18，孔径 3μm），微波炉 R（E-630D型，电子工业部778厂），聚 四氟乙烯高压罐 容（积20mL，壁厚6mm）。 乙酸钠，苯酚，异硫氰酸苯酯，乙腈 色（谱纯），盐 酸 优（级纯），石英二次蒸馏水。 2.2色谱条件 流动相A为乙酸钠和乙腈的混合液，pH6.40， 流动相B为60％乙腈水溶液。A和B流动相采用曲 3.2 水解条件的选择 线型梯度淋洗法，检测波长254nm，柱温380。 图1所示为鸡蛋样品的微波水解结果。选择 2.3 试验 300W功率水解7min效果最佳。 取鸡蛋一只，打碎用匀浆器混匀。均匀取样 3.3 微波水解的回收率及精密度 7mg，加水解液1.2mL于聚四氟乙烯罐内，旋紧内 取氨基酸混合标样1mL，加入水解液1.2mL， 外盖，放入微波炉内水解，完毕，用水转移样品于 在300W功率时水解7min条件下进行假水解实验 本文收稿日期：1995-11-01，修回日期：1996-01-18 以验证微波水解的回收率，见表2。微波水解的空白 对照实验表明，本法没有带来任何氨基酸干扰。 表2氨基酸标液的回收率(n=5) 一条新的途径。 3.4 微波水解的准确度 取均匀的鸡蛋样品同时进行微波水解、经典水 解1（）和Pico-Tag工作台水解2（），结果列于表3。由表