成熟时间对水牛卵母细胞体外成熟影响的研究.pdfVIP

第 31卷 第 1期 家畜生态学报 VoI．31No．1 2010年 1月 ActaEeologiaeAnimalisDomastici Jan．2010 成熟时间对水牛卵母细胞体外成熟的影响研究 杨红远 ，洪琼花 ，赵智勇 ，赵家明。 (1．云南省畜牧兽医科学院，云南 昆明 650224；2．大理州家畜繁育指导站 ，云南 大理 671000) [摘 要] 研究体外成熟时间对沼泽型水牛卵母细胞核质成熟的影响 试验对比了24h、25 h、26h、27h的成熟时间对卵母细胞第一极体排 出率及体外受精后卵裂的影响。结果表明，在 至少 24h之 内大部分水牛卵母细胞就已经完成 了完全的核质成熟。 [关键词] 沼泽型水牛；卵母细胞；极体；卵裂 [中图分类号] $811．5 [文献标识码] A [文耄编号] 1004—5228(2010)01—0083-03 卵母细胞的体外成熟包括 了核成熟和质成熟 ， 公 司 。 核成熟以卵母细胞完成第一次减数分裂 ，排 出第一 1．2 试验仪器 极体为标志，只有达到核成熟的卵母细胞才有受精 体视显微镜(型号 SZX9，日本生产)，电子天平 能力 ；然而 ，体外的成熟培养证 明，卵母细胞要具有 (型号BP3100S，德国生产)，恒温板 (型号 HP一4530， 最佳 的发育能力 ，必须在核成熟之后 的一段时问内 日本生产)，超纯水仪 (MiLLi—Q，美 国生产)，高压灭 达到胞质 的成熟 。但是 ，要判断胞质的成熟并不容 菌器 (型号 SS245，日本生产)，倒置荧光显微镜 (型 易，因为 目前并没有胞质成熟 的明显标 志。加之种 号 IX一71，日本生产)，数显恒温水浴锅 (型号 HH一 属不同的影响，因而，在卵母细胞最佳成熟时间的结 420S，江苏金坛市环保仪器厂生产)，广 口小保温杯 论上就出现了不同的结果。在黄牛卵母细胞体外成 (型号 L，日本生产)，离心机 (型号 TDL-40B，上海 熟 中这个时间在 18～24h之间[1,I1]，猪 的卵母细胞 安亭科学仪器厂生产)，超净工作 台(型号 BCM一 成熟时间差异更大，为 36～48}l[引。在水牛卵母细 1000，苏州苏净集 团安泰公司生产)，pH 仪 (型号 胞体外成熟的研究 中，认为大多数卵母细胞完成第 828，美国生产)。 一 次减数分裂达到 M Ⅱ期 的时间从 15hE。到 24 1．3 卵母细胞的采集 h[4]，因此 ，控制卵母细胞体外成熟的时问对体外胚 从昆明市水牛屠宰场收集德宏水牛卵巢，置于 胎生产具有重要的意义，成熟时间太短会影响受精 37℃生理盐水 中4h内运 回实验室。用带 16g针 能力，甚至不能受精 ，成熟时间过长则会导致卵母细 头的10mL注射器先吸取约 1mLPBS，然后抽取卵 胞老化影响受精和此后的发育能力 。 巢表面直径 2～8mm 卵泡 中的卵丘细胞一卵母细 1 材料与方法 胞复合体 (COCs)。抽取 5～10枚卵巢后将抽取液 1．1 试验药品