色象中药对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.pdfVIP

陕西中医2011年第32卷第6期 755 ·实验研究· 色象中药对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。 洪逊强 杨 柳△ 刘利利 潘思山 南方医科大学中西结合医院皮肤科(广州510315) 摘 要 目的：研究黑白两类中药水提取物对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法： MTT法测定中药对细胞增殖的影响；NaOH裂解法测定黑素合成含量。结果：与对照组 相比，黑色组中药大部分对黑素细胞增殖及黑素合成有明显促进作用(Po．05或Po． 01)，而白色组大部分则有明显抑制作用(Po．05或Po．01)。另外，研究发现白蒺藜、 白芷、白茯苓、白芍、熟地这五味药物具有双向调节作用，而桃仁虽为白色，但却起着促进 作用。结论：中药材的颜色与色素代谢调节之间存在一定的相关性，色象中药在色素代谢 障碍性皮肤病的临床治疗中具有应用前景。 主题词 中药／药理学 色素细胞 色素代谢 @中药色象 色素障碍性皮肤病易诊难治，目前临床上尚缺乏较有效的 地、女贞子、菟丝子、补骨脂、红花、丹参、鸡血藤、墨旱莲、益母 治疗方案，对其机理仍不十分清楚。中医在长期医疗实践中积 草)；②白(浅)色组(白茯苓、白术、白蒺藜、白及、白芷、桃仁、当 累了“以白治黑，以黑治白”的临床经验。2007年以来，我们对中 归、山药、白芍、薏苡仁)。 药色象理论形成的背景及研究意义多次在全国中西医结合、中 2．2 中药药液的制备 分别称取上述20味中药，单味 医及中西医结合皮肤病专业学术会议进行交流[1”]，首次将这 药物饮片经鉴定后置砂锅中，加相当于药材量的8倍的蒸馏水 种表明药材颜色与疗效相关的现象，称之为“中药色象”。将这 种治疗色素病色效相关的中药，称之为“色象中药”。本研究通 过滤。合并两次滤液，于水浴上分别进行浓缩，用不含胎牛血清 过查阅大量的文献资料及临床资料，筛选出中医传统治验及现 培养基进行稀释，使药物终质量浓度为20肛g／mL、10pg／mL、 代研究表明治疗色素病有效的黑白两类中药各10种，研究色 5pg／mL，储存备用。 象中药对黑素细胞增殖及黑素合成的影响，探讨色象中药与色 2．3 黑素瘤细胞增殖的测定[43采用四甲基偶氮唑蓝 素代谢的相关性，为色象理论及临床辨证用药提供科学依据。 比色法(MTT法)，细胞常规培养后，取对数生长期细胞常规消 1 实验材料 1．1 黑素瘤细胞株来源 人A375黑素瘤细胞株由中 及5％CO。下孵育24h后，每孔加入100弘1不含胎牛血清培养 国科学院上海细胞研究所提供。 1．2 实验中药 包括制首乌、熟地、女贞子、菟丝子、补 5肛g／mL，每个浓度设3个复孑L，并设对照组：单纯培养基组、中 骨脂、红花、丹参、鸡血藤、墨旱莲、益母草、白茯苓、白术、白蒺 药对照组(培养基+中药)和空白对照组(培养基+细胞)，置于 藜、白及、白芷、桃仁、当归、山药、白芍、薏苡仁，购自南方医科 大学南方医院中药房，经南方医科大学中医系中药炮制教研室 鉴定。 下孵育下4h，弃上清液，每孔加150扯IDMSO，振荡10min，在酶 1．3 试剂 MTT(四甲基偶氮唑蓝)、二甲基亚砜标仪490nm波长下测量各孔吸光度值(0D值)，每组重复3 次，取平均值。用吸光度值表示细胞增殖。细胞增殖一实验组的 (DMSO)、0．25％胰蛋白酶一EDTA(美国Sigma公司)，DMEM 培养液(高糖)、10％胎牛血清(美国Gibco公司)，其它试剂均吸光度值 中药对照组的吸光度值；空白对照组细胞增殖=空 为国产分析纯。 白对照组的吸光度值单纯培养基对照组的吸光度值。 1．4 主要仪器 倒置显微镜(Nikon公司)，自动酶标仪 2．4 黑素合成含量测定[5“]NaOH裂解法，黑素细胞 (芬兰Thermo公司)等。 接种方法