体外冲击波对MG63细胞中碱性成纤维细胞生长因子表达的影响.pdfVIP

中国药物与临床 2010年 3月第 10卷第 3期ChineseRemediesClinics，March2010，Vo1．10，No．3 · 301 · 体外冲击波对MG63细胞中 碱性成纤维细胞生长因子表达的影响 付海瑞 李 平 庞利凯 余晓栋 体外冲击波 (ESW)是近年来用于治疗骨折不愈合的一 l，37℃下放置60min，洗涤4-6次后，每孔加酶标抗体 100 种新的保守治疗方法，凶其费用低、痛苦小且有效而受到关 l，37℃下放置 60rain，然后加 50 I终止液 ，在 492nm处 注。但ESW治疗骨折不愈合的生物学机制还不清楚。有研究 测吸光度值。 显示，ESW对成骨细胞的生物学活性、分化及各种细胞因子的 1．3 统计学处理 表达有影响Ⅲ，但对碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的 各实验组独立重复检测3次，所得数据用 表示，数据 影响报道较少。本研究采用不同能量ESW 干预MG63细胞代 结果采用 SPSS13．0软件进行统计 。组问比较用 Student— 谢，旨在观察ESW 冲击后MG63细胞中bFGF的表达变化。 Newman—Keuls检验。 1 材料和方法 2 结 果 1．1 材料 冲击后6、24和48h，实验组的bFGF值均高于对照组 ，C 1．1．1 细胞：人成骨肉瘤细胞MG一63(中国科学院细胞库，上 组检测值最高，4组均数差异有统计学意义 (P0．05)，两两比 海)，所用培养液为含有 10％胎牛血清、50~g／ml维生素 C、 较除B组和 C组差异无统计学意义外 ，其余均有统计学意义 100U／ml青霉素和 100txg／ml链霉素的达氏修正依氏培养基 (PO．05)。冲击后 24h与6h相比较，各组值继续增高，但除 (DMEM，Sigma公司)。 B组差异有统计学意义外其余均无统计学意义。冲击后48h 1．1．2 试剂和仪器 ：人成纤维细胞因子定量酶联检测试剂盒 与6、24h相比，各组值仍然增高，各组差异均有统计学意义 (进 口分装，上海森雄科技实业有限公司)，体外冲击波治疗 (PO．05)。见表 1。 仪 H『B—EswL—VG型体外冲击波碎石机 ，Q／19ZJHB03-- 表 l ESW 冲击后各实验组bFGF平均值 (±s) 2001(HB--ESWL电磁式)]，旋盖塑料细胞培养管 (上海灿溪 经贸有限公司)，细胞冲击波固定装置 (自制)，胰蛋 白酶 (Sig— m a 公司)，此外还有超净工作台、CO：孵箱 、倒置相差显微镜 和离心机。 1．2 细胞培养和检测 1．2．1 细胞培养：选择对数生长期的细胞．以lxlOS／ml细胞浓 3 讨 论 度接种于5Om1的细胞培养瓶中进行培养。待细胞贴壁并铺 3．1 骨折愈合过程：成骨细胞在骨折愈合过程中起重要的作 满瓶壁后用胰蛋白酶消化，待细胞变圆从细胞培养瓶壁上脱 用_2]。骨折后，骨折端坏死的成骨细胞可释放许多内源性生长 落下来时终止消化 ，将细胞离心计数 ．然后仍以 1xl05／ml细 因子，包括胰岛素生长因子 I、II(IGF—I、IGF—II)、血小板 胞浓度进行传代培养。待培养到足够的细胞数量后，将细胞 衍生生长因子(PDGF)，bFGF、p转化生长因子 (TGF一13)等 ，这 以 1xl0~ml细胞浓度转入旋盖塑料细胞培养管中，共 12管， 些组织因子又可刺激间充质细胞转化为成骨细胞，合成并分 每管