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遗传 HEREDITAS(Beijing) 4(2): 13-151982 依赖于DNA 的RNA聚合酶的研究 IV.615小鼠和白血病615小鼠 L（615)肝细胞 RNA聚合酶B的结构分析 黄崇喜 刘连瑞 王 斌 王恢鹏 王金霞 （中国科学院遗传研究所，北京） 真核细胞转录是一个极为复杂的过程，有很多迄 斯亮蓝 W（/v)溶于40％甲醇、7％乙酸中〕，染，小 今尚未研究清楚的因子参加。依赖于DNA的RNA 时，然后脱色 叨（％甲醇、夕％乙酸和水）。 聚合酶 (E.C.）直接或间接地和转录的调节 3.SDS聚丙烯酞胺板状凝胶电泳 按照Weber 过程有关。真核细胞有三种结构不同的RNA聚合 和Osborn}’的方法，作如下修改：胶板为16x16x0.2 酶05,6,8,10,113，它们有不同的转录功能。因此，研究真 cmo10％的聚丙烯酞胺的配制：13.3mlC液，25．7ml 核细胞 RNA聚合酶的结构对弄清酶对转录和调节显 ＾液，0.4mlD液，0.6mlE液，201,1F原液，混合后 得十分重要。 灌入板框内，胶顶部小心加双蒸水封顶，待胶凝聚后除 RNA聚合酶B是转录前体 mRNA 的酶，所以研 去上层水，加4％上层胶 (1.3mlC,8,3mlB,O.lml 究B酶的结构对研究结构基因的表达是很重要的。以 D,0.3mlE和10川F原液）最后加人槽蓖，待胶凝后 前我们曾报道过 RNA聚合酶的分离t1,2’和 RNA 聚 应用。 合酶B的比较3〔3，现在我们将介绍关于615和 L615 胶体凝聚后，以0．025MTris-HCIpH8．3,0．192M 小鼠RNA聚合酶B的结构分析。 甘氨酸-0.1% SDS为电泳缓冲液，预电泳半小时。加 人样品后，以30mA电泳到指示染料走到胶底部，取出 材 料 和 方 法 胶体，在25%异丙醇、10％乙醇中固定10小时以上， 一（）RNA聚合酶的分离提纯 染色和脱色同前。 按照我们以前所报道的方法2〔’分别从61，和L615 样品在电泳前进行处理，使之成为。.625MTris- 小鼠新鲜的肝组织中提取 RNA聚合酶B, HClPH6.8,2% SDS,30％甘油、1%18-疏基乙醇、 二（）聚丙烯酥胺凝胶电泳 0.001-7,澳酚蓝的溶液。电泳前加热工0009C2分钟。 1试‘剂 A.0.375MTris-HC1,PH7.，；B.1M 呼．梯度聚丙烯酸胺凝胶电泳 与板状胶体电泳 Tris-HCI,PH6.8;0.30%聚丙烯酞胺单体— 0．8% 相同。我们采用了5%-20%丙烯胺浓度梯度。据我 聚丙烯酚胺双体 W（/V)溶于A溶液中，用 Whatman 们的经验，制备胶体时40ml胶溶液以20分钟铺成梯 1号游纸过滤，滤液装于棕色瓶中，4℃保存备用；D. 度为宜，制备完成后不要移动胶体，以免破坏梯度。 10%SDS;E.1％过硫酸胺 (W/V)鲜（配制），上述 溶液均以双蒸水配制；F.TEMED, 结 果 分 析 2．不变性条件下的管胶电泳 不变性条件下聚 1.L615和 “5小鼠RNA聚合酶B在不变性凝 丙烯酞胺凝胶电泳根据Smith和 Braun的方法 〔，‘’修 胶电泳上的比较 这两种B酶在不变性的聚丙烯酚 改如下：3.4mlC液加2ml甘油，加0.5mlE液，5y1 胺凝胶电泳上基本为一条电泳带 图（1)，但仔细观察 1;原液，最后加A液到20mlo混匀后注人。.4X8m1的 还发现在主带之上有一条很