小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

维普资讯 第 19卷 5期 中 国 病 毒 学 19 (5)：493—497 2004年 1O月 V1ROLOGICA S1NICA October2004 小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠 杆菌中的表达 陈 可，张珈敏，胡远扬料，刘传凤 (武汉大学生命科学学院，湖北武汉 430072) TheNucleotideSequenceandExpressioninE．colioftheP／er~ rapae GranulosisVirusGranulinGene CHEN Ke，ZHANGJia—min，HUYuan—yang ， LIU Chuan—feng fCollegeofLifeSciences，WuhanUniversity,Wuhan430072，China) Abstract：AccordingtotheGranulingene’S12highlyconservatNenucleotides(TATAAGGAATTT) upstreamfromhteproteininflationcodonandhtesequenceofhtePierisbrassiaegranulovirus(PbGV) granulingene，primersweredesignedtoamplifyhtePierisrapaegranulosisvirus(PrGV)granulingene． TheproductofPCR amplificationwasabout850bp．Th eresultofsequencinghtesegmentshowedthe completenucleotidesequenceofhtesegmentwas855bp．Th esegmentcontainedoneORF encoding PrGV granulingenewhichstartsatposition38~40andendsatposition779～781．Th elenght ofhte ORFis744bpandhtelenght ofpredictedproteinis247aminoacidwiht MW ofabout2．9178×10Da． Comparisonoftheidentitieswiht othergranulosisviursgranulingeneshowedhtegranulingeneis highly conservedingranulosisviurs．Th ePrGV granulin genewasinsertedintoan exprssionvector, PET-28a，toyieldhterecombinnatexpressionplasmidpet一28a—Gran．AfterinductionbyI门 G theresult ofSDS—PAGE showedhteexpressionofPrGVgranulininE．coliwasobtained． Keywords：Pierisrapaegranulosisviurs；Granulin(PrGV)；Comparisonoftheidentities；Recombinnat expressionplasmid 摘要：根据颗粒体病毒颗粒体蛋白(Granulin)基因在其起始密码子上游的12个碱基高度保守序~Jl(TATAAGGAAVVF) 以及大菜粉蝶颗粒体病毒 (PbGV)的颗粒体蛋白基因的序列n设计引物，PCR扩增得到850bp左右大小的片段， 核苷酸序列测定结果表明该病毒的 granulin基因全长为 855bp，起始密码位于第 38～40位碱基，终止密码位于 779～781位碱基，编码框序列全长为744；推测该基因编码一段 由247个氨基酸组成的多肽，分子质量约为2．9