微流控电融合芯片的研制及其在体细胞重编程中的应用.pdfVIP

第３５卷第１期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１ ２０１３年１月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　Ｊａｎ．１５　２０１３ ２９ 文章编号：１０００５４０４（２０１３）０１００２９０５ 论著 微流控电融合芯片的研制及其在体细胞重编程中的应用 １，２ １，２ １，２ ２，３ ２，３ １，２ 吴　畏 ，徐海伟 ，屈　娅 ，张小玲 ，胡　宁 ，阴正勤 　　（４０００３８重庆，第三军医大学西南医院全军眼科中 １ ２ ３ 心 ，视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室 ；４０００３０重庆，重庆大学生物工程学院 ） 　　［摘要］　目的　开发高通量的细胞电融合平台，并通过此平台将小鼠胚胎干细胞（ｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ， ｍＥＳＣｓ）与体细胞融合，探讨融合细胞的多能性。方法　本实验室自主研发微流控芯片，将转染了绿色荧光的ｍＥＳＣｓ与转 染了红色荧光的ＮＩＨ３Ｔ３细胞进行电融合，并计算其排队率与融合率。通过流式细胞仪筛选出表达两种荧光的融合细胞， 观察融合细胞的表型。ＲＴＰＣＲ检测ＮＩＨ３Ｔ３、ｍＥＳＣ以及融合细胞的多能性基因（Ｎａｎｏｇ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＬＩＮ２８）ｍＲＮＡ的 表达水平。结果　自主研发了微流控芯片，构建了高通量的细胞电融合平台，通过此平台将 ｍＥＳＣｓ与ＮＩＨ３Ｔ３进行电融 合，其排队率为（４４．３５±１０．９９）％，融合率为（５９．８８±２０．０３）％，融合细胞可形成类似于ＥＳＣ样的克隆。ＲＴＰＣＲ法结果 显示ｍＥＳＣ和融合细胞均表达多能性基因Ｎａｎｏｇ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＬＩＮ２８ｍＲＮＡ，而ＮＩＨ３Ｔ３不表达。结论　通过自主研发 的微流控芯片，可实现ｍＥＳＣｓ与ＮＩＨ３Ｔ３的高效融合，使体细胞重编程为多能性干细胞。 　　［关键词］　 电融合；体细胞重编程；微流控芯片；胚胎干细胞 　　［中图法分类号］　Ｑ３１９；Ｒ３９４３３；Ｒ３９４．３　　 ［文献标志码］　Ａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｃｅｌｌｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎｃｈｉｐａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ １，２ １，２ １，２ ２，３ ２，３ １，２ １ ＷｕＷｅｉ ，ＸｕＨａｉｗｅｉ ，ＱｕＹａ ，ＺｈａｎｇＸｉａｏｌｉｎｇ ，ＨｕＮｉｎｇ ，ＹｉｎＺｈｅｎｇｑｉｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， ２ＫｅｙＬａｂｏｆＶｉｓｕａｌＤａｍａｇｅａｎｄＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＆ＲｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ３ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３８；ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３０，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｃｅｌｌｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎｐｌａｔｆｏｒｍ，ｂｙｗｈｉｃｈｔｏｆｕｓｅ ｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ｍＥＳＣｓ）ｗｉｔｈｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌｓ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙｏｆｔｈｅｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｗｉｔｈｔｈｅｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｃｈｉｐｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂｙｏｕｒｌａｂ，ｗｅｆｕｓｅｄｔｈｅｍＥＳＣｓｃａｒｒｙｉｎｇＧＦＰｗｉｔｈＮＩＨ３Ｔ３ ｃｅｌｌｓｃａｒｒｙｉｎｇＲＦＰ，ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｄｔｈｅａｌｉｇｍｅｎｔｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｔｈｅ