导流杂交基因芯片技术在肠道致病菌检测中的应用研究.pdfVIP

ChinJNosocomiolVo1．18No．102008 · 论 著 · 导流杂交基因芯片技术在肠道致病菌 检测中的应用研究 邢建明 ，张 延 ，周丰宁 ，张红河 ，沈翠芬。，吴晓芳 ，毕 丹 ，程红玲 ，姚丽惠 (1．湖州市妇幼保健院检验科，浙江 湖州 313000；2．杭州市第一人民医院基因诊断实验室，浙江 杭州 310006； 3．湖州市中心医院检验科，浙江 湖州 313000；4．湖州市疾病预防控制中心，浙江 湖州 3130O0) 摘要：目的 建立导流杂交芯片技术检测粪便标本中8种肠道致病菌。方法 以细菌 16SrDNA 和 23SrDNA 序列设计通用引物和寡核苷酸探针，将活性氨基标记的探针依次固定在BiodyneC膜上 ，制成检测芯片，用标记生 物素的引物进行PCR扩增，将扩增产物与检测芯片在核酸分子快速杂交仪上进行杂交，以POD和TMB进行显 色，判断结果；应用该方法检测 8种肠道致病菌标准菌株和 120份腹泻患者粪便标本，通过细菌培养结果 比较该 方法的有效性。结果 120份临床粪便标本中，采用导流杂交芯片共检出68份(56．67 )携带肠道致病菌；细菌 培养鉴定出63份(52．50 )携带肠道致病菌，其中58份导流杂交芯片与细菌培养结果一致，准确率为 85．29 。 结论 导流杂交芯片技术能够快速准确检测 8种常见肠道致病菌，而且适用于流行病学调查研究。 关键词 ：基 因芯片；肠道致病菌；检测 中图分类号 ：R378．2 文献标识码 ：A 文章编号：1005-4529(2008)10—1494—04 Flow—throughHybridizati0nandGeneChip in Intestinal PathogensDetection：AnAppliedResearch XING Jian-ming ，ZHANG Su，ZHOU Feng—ning，ZHANG Hong—he，SHEN Cui—fen WU Xiao-fang，BIDan，CHENG Hong—ling，YAO Li—hui (*M icrobiologyLaboratory，HuzhouMaternityandChildCareHospital， Huzhou，ZJlejiang313000， ina) Abstract：OBJECTIVE To establish a flow-through hybridization and gene chip method for detecting eight intestinalpathogens．METHODSBiotin-labeleduniversalprimersforamplificationofbacterial16SrDNA and23S rDNA wereusedtoamplifyextractedgenomeDNA．Theeightintestinalpathogenswereidentifiedbyhybridization ofthePCR productswithimmobilized specificprobeson BiodyneC membraneinrapid hybridization machine． ColordevelopmentwasachievedbyaddingPODandTMB．A judgementwasmadeaccordingtocolorreactions． Eightstandardreferencestrainsand 120fecalsamplesfrom patientswithdiarrheaweredetectedand identified usingthisassay．Thereliabilityoftheassaywasverifiedbybacterialculture．RESULTSAmong120fe