核黄素与脱氧核糖核酸相互作用的液滴荧光法研究.pdfVIP

第24卷第5期 Ln西大同大学学报(自然科学版) V0I．24．N0．5 2oo8年 1O月 J0umalofShanxiDatongUnjversity(NatumlS(：ience) Oct．2oo8 核黄素与脱氧核糖核酸相互作用的液滴荧光法研究 陈泽忠，白云峰，柴化鹏，赵义清，冯 锋 (山西大同大学化学化工学院，山西大同()37009) 摘 要：在接近人体生理 pH条件下，采用紫外光谱法和液滴荧光法研究了核黄素和小牛胸腺 DNA的相互 作用．研究结果表明，随着DNA浓度增加，核黄素产生紫外光谱减色效应及荧光猝灭效应．进一步研究发现盐效应 可使核黄素的荧光猝灭效应减小，由此推测核黄素与DNA之间可能存在嵌入作用和静电结合作用．通过计算和 scatchard作图求得该反应的结合常数与结合位点数． 关键词：核黄素 脱氧核糖核酸 液滴 荧光猝灭 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：l674一O874f2008)05—0026—04 脱氧核糖核酸(DNA)是生物体 内重要的遗传 LS55荧光／{瞵光饯光光度计 (美国PerkinElmer 物质，可与 DNA在体外直接发生作用的小分子多 公司)；Lambda35紫外一可见分光光度计 (美 国 数可用于抗癌症的治疗．体外研究比活体内研究周 PerkinElmer公司)；AP25o0型电子天平(美国0haus 期短且费用低，因此研究药物小分子与DNA的相 公司)；P一74900一l0型注射泵(美国C0k—Parmer公 互作用，对于从分子水平上了解DNA的结构与功 司)；液滴附件(自制)．／J、牛胸腺 DNA(sigma公司进 能、设计与筛选抗肿瘤药物具有非常重要的意义．目 口分装)：用0．05mol／L的NaCl配制成浓度为0．30 前研究小分子与DNA相互作用的主要方式有 ：荧 g／L储备液；核黄素 (sigma公司进 口分装)：用水配 光光谱法fl_、电化学法 、化学发光法I5l等．核黄素 制成 1．33×10 m0l／L的储备液 ；0．05m0l／L的rrris— (VitaminB)属于维生素药品，常用于防治 口角炎等 HCl缓冲溶液(pH=7．40)；所用试剂均为分析纯 ，实 炎症，它有可能成为治疗肿瘤的光敏药物之一；核 验用水均为二次蒸馏水． 黄素具有较强的荧光，且对活体细胞及 DNA不具 1．2实验方法 有损伤和破坏作用．因此研究核黄素与DNA的相 1．2．1紫外吸收光谱的检测 互作用在生化及临床上都有一定的意义．荧光分析 在 l号 l0mL容量瓶中加入 1．0mL核黄素储 法具有灵敏、简便、快速的特点 ，可用于药物小分子 备液和 2．0mL的Tris—HCl缓冲溶液稀释至刻度 ； 与 DNA相互作用机理的研究及 DNA含量的测定． 在2号 10mL容量瓶中加入 1．0mLDNA储备液和 与常规荧光法相比，动态液滴荧光法可充当无光窗 2．OmLTris—HCl缓冲溶液稀释至刻度 ；在 3号 l0 光池，且所需样品量少、测试时问短、噪声低、检测 mL容量瓶 中加入 1．0mL核黄素储备液、1．0mL 灵敏度高 ．在接近人体生理pH条件下，采用动态 DNA储备液和2．0mLTris—HCl缓冲溶液；混合均 液滴荧光法研究核黄素与DNA的相互作用，初步 匀后稀释至刻度．在 200—350nm范围检测其紫外一 探讨二者的作用方式． 可见吸收光谱． 1．2．2液滴荧光强度的测定 1