猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

第30卷 第 11期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30，NO．11 2008 年 11月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine NOV． 2008 猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 华秋东 1,2，吴志军 ，，姜成刚 ，沈 楠 ，陈维多 ，相文华 ，周建华 f1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001； 2．东北农业大学 ，黑龙江 哈尔滨 150030；3．哈药集团，黑龙江 哈尔滨 150018) 摘 要：利用PCR技术从质粒pSHIV89．6P中扩增猴免疫缺陷病毒(srv)衣壳蛋 白p27基因，并将其插入表达 载体 pET32a(+)构建重组质粒 pET32a．p27，转化大肠杆菌BL21，经 IPTG诱导 ，对其产物进行 SDS．PAGE和 Westernblot分析，并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠，制备单克隆抗体 。结果显示，gag基因的p27相应片段 为763bp，其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化，获得 目的蛋 白p27纯度可达 90％以上。利用淋巴细胞 杂交瘤技术获得 5株稳定分泌抗 p27的单克隆抗体细胞株，分别命名为 1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂 交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为 1：12800、1：25600、1：819200、1：51200和 1：409600。免疫球蛋 白类型均为 G1型，轻链均为 链 。Westernblot和IFA试验结果表 明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有 很高的特异性，为进一步开发 SIV早期诊断试剂盒奠定了基础 。 关键词：猴免疫缺陷病毒；p27蛋 白；单克隆抗体 中图分类号：$852．43 文献标识码：A 文章编号：1008．0589(2008)11-0901．05 Developmentofmonoclonalantibodiesagainst thecapsidp27proteinofSIVmac239 HUAQiu—dong ，、舢 Zhi-jun，JIANGCheng-gang，SHENNan， CHEN W ei—duo，XIANG W en—hua ，ZHOU Jian．hua (1．NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences． Harbin 150001，China；2．NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；3．HrabinPharmaceuticalGroup， Harbin150018，China) Abstract：Thecapsidp27gaggeneofSJV 9wasclonedintothepET32a(+)andexpressedinE．coliBL21．Thefusion proteinwaspurifiedbyNi2 affinitychromatographyandusedasantigenformonolconalantibodydevelopment ． Fivehybridoma celllinesthatsecretedmonoclonalantibody(mAbs)againstp27wereestablishedandweredesignatedasIA5，1C7，3C2，2D12 and3D12．AllthesefivernAbswe