线粒体DNA细胞色素b基因与D环区复合扩增鉴别种属.pdfVIP

鎏匡堑堑堂 线粒体DNA细胞色素b基因和 D环区复合扩增鉴别种属 白丽萍，姜先华，赵贺群，于蛟 (辽宁省公安厅刑事科学技术研究所，辽宁沈阳110032) 【关键词】 法医物证学；mtDNA；cyt—b基因；D环区复合扩增；鉴别种属 本文介绍一种快速区分人与动物的种属鉴定方 引物序列分别为： 法。本方法采用自行设计的D—loop区人特异的两对CATGATGAAA一3’ 引物及1对cyt—b基因通用引物，对线粒体DNA进GATATI’IGTCCTCA一3’。 行PCR复合扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测， 1．3实验方法 1．3．1 人可以扩出D—loop区HVl区504bp和HV2区扩增模板的制备 血斑、肌肉、应用 3条扩增片段，动物只能 422bp及cyt—b基因358bp 扩出358bp1条片段，以此鉴别检材的种属。现将实 1．3．2mtDNA 验方法报告如下。 片段的复合扩增 dNTP、1．5mmol／L 1材料与方法 1．1实验样本 171例样本，其中人血斑38例(黄种人30份， 白种人6份，黑种人2份)，1～3年的陈旧人骨骼5 例，动物血斑、肌肉或毛发128例，包括牛(12温10rain，4ciC保存。 1．3．3 例)、猪(13例)、兔(10例)、驴(10例)、鸡mtDNA特异扩增片段的检测取扩增产物 (11例)、猫(6例)、山羊(4例)、绵羊(10例)、 5m，2％琼脂糖凝胶电泳分离，EB染色，在紫外检 马(3例)、狗(11例)、大白鼠(12例)、小白鼠测仪下检测、照相。 (11例)、鸭(4例)、牛蛙(1例)、鲤鱼(4例)、 2结果与讨论 鳝鱼(3例)、阿拉伯狒狒(1只)、梅花鹿(1只)、 剑羚(1只)19种动物。 所有38例人血斑样本及5饲陈旧人骨骼样本均检 1．2引物序列 测到358、422、504bp3条扩增片段，其他所有128例 根据Anderson等报道的mtDNA碱基序列，在D—动物样本均检测到一条358 bp的扩增片段，见图1。 loop区域HVI区中选择15976～15997为引物¨o， 16465—16482为引物旧1，两引物相对5’端之间碱基 数为504bp。在D—loop区域HVlI区中选择7—27为 ∞0№ lO∞b ”№ 引物¨o，409—428bp为引物o，两引物相对5’端之 ∞∞o ≈№ 7— 间碱基数为422bp，引物序列分别为：(1)5 1 34 7