马铃薯钴60辐照后代基因遗传变异的AFLP分析.pdfVIP

园艺学报2011，38(增刊)：2525 alas．ac．cn http：／／www AetaHorticIdturaeSinicQ 26．tom E-mail：yuanyixuebao@1 马铃薯 60辐照后代基因遗传变异的AFLP分析 廖华俊，宁志怨，董 玲，江 芹，李卫文，张雪娇 (安徽省农业科学院园艺研究所，合肥23003i) 安徽省属于马铃薯中原二季作区，每年可以种植春、秋两季马铃薯，但春马铃薯生长期间前期 低温后期高温阴雨，而秋马铃薯生长期间前期高温阴雨后期低温，对马铃薯品种特性有着特殊的需 求。目前我国马铃薯品种除了少数从国外引种，其余绝大部分由北方马铃薯科研单位选育。由于南 北地理和气候特点的巨大差异，使得北方选育的马铃薯品种在安徽省种植期间品种抗逆性表现受到 限制。另一方面，大多数马铃薯品种在安徽不开花或花而不实，因而不能开展正常的马铃薯杂交育 种。因此，采用物理方法进行诱变和系统选育是中原二季作区马铃薯品种选育的一种有效途径。 采用不同剂量的钴60辐射线(10、20、30、50和80 Gy)对不同品种的马铃薯薯块(费乌瑞它、 中薯3号、郑薯6号)分别进行辐照处理，并对其Ml变异后代进行生长期、品质、产量和抗逆性 等性状筛选，将筛选出具有目标农艺性状的马铃薯株系按单株进行收获，并在M2代提取叶片DNA， 进行分子生物学分析，研究辐射诱变对马铃薯遗传变异的影响。 采用改良的CTAB法提取叶片DNA：(1)取马铃薯幼嫩叶片3～4片，放入2mL的离心管中， rain； (2)加 加入液氮将其研成粉末状，加入预热的DNA提取液，混匀后于65℃条件下水浴40 800r·min‘1离心10—15min： (3) 等体积的氯仿：异戊醇(24：1)混合液，上下颠倒混匀后，在9 在上清液中加入等体积的预冷的异丙醇溶液后，颠倒混匀直至析出絮状DNA沉淀：(4)加入70％ 的乙醇溶液洗涤DNA和风干DNA；(5)加TE溶液溶解DNA，保存于一20℃冰箱中备用。 AFLP标记：采用EcoRI和M_seI双酶切；预扩增引物采用E／M核心引物，扩增程序为94℃3 l min；94℃30s；5612min：72℃lmin：4℃保存，共进行20个循环。反应结束后将反应液用 TE缓冲液稀释20倍，用作选择性扩增的模板；选择性扩增采用E和M的选择性引物组合，扩增程 序为94℃3rain；94℃45s：65℃45S(第l轮循环65℃，第2～12轮循环每轮递减0．7℃，第 13～36轮循环保持在56℃)，共进行36个循环；72℃，lmin：4℃保存。PCR产物用6％变性 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，80W恒功率电泳2h，银染后观察。 在64对选择性扩增引物中，筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的引物组合，构 建了马铃薯辐照后代的AFLP指纹图谱。通过辐照后代的AFLP指纹图谱可以将所筛选到的40个马 铃薯优异株系全部区分开来，说明马铃薯辐照后代基因变异显著，采用物理诱变的方法来进行马铃 薯育种是可行的。 关键词t马铃薯；诱变育种；AFLP分析 中圈分类号：S532 文献标识码lA 文章编号l0513．353X(2011)S-2525．01 收稿日期I2011—08一17