神经毒素诱导多巴胺能神经元凋亡与分泌粒蛋白Ⅲ表达失调与相关性研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 神经毒素诱导多巴胺能神经元凋亡与分泌粒蛋白III 表达失调的相关性研究 前言 嗣再 disease，PD)是发生在中老年常见的神经系统退行性 帕金森病(parkinson，s 疾病，主要病变在黑质纹状体通路，显微镜下可见黑质致密部(substaJltia11igrapars compacta，SNpc)大量多巴胺能神经元凋亡，残留的神经元细胞胞浆中圆形嗜酸 性Le、Ⅳy包涵小体形成。PD发病多种因素参于其中，遗传因素可使患病易感性增 加，而在环境因素及衰老的相互作用下，导致黑质多巴胺能神经元凋亡加速，多 巴胺(dop姗ine，DA)合成减少，出现一系列PD的症状。近年来，大量流行 病学及病例．对照研究揭示，许多环境毒素诸如杀虫剂、除草剂等可引起大脑黑质 多巴胺能神经元凋亡，长期接触可引发PD；而做为脑内正常神经递质之一的DA， 一旦其在胞质内或细胞外间隙的游离形式升高同样可导致细胞损伤。在PD的治 疗方面，针对患者体内紊乱的神经内分泌环境，以逆转多巴胺能与胆碱能神经递 质失衡为根本目的的医疗手段前景可观。 III)是分泌粒家族(grallinf．锄ily) 分泌粒蛋白III(secretograllinIII，SCG3／Sg 中一个较新的成员，其生物学特性、病理生理学及临床意义日益受到关注。SCG3 广泛分布于内分泌腺体、神经内分泌组织与神经系统。大量研究已经表明，在反 面高尔基网状结构(trans．G019i 类与胺类物质进行组装、靶向输送以及后续的分泌颗粒形成发挥着重要作用。 SCG3在代谢性疾病(病理性肥胖、糖尿病、动脉粥样硬化)，神经内分泌肿瘤(小 细胞型肺癌、前列腺癌)以及由雌激素代谢失调引起的内分泌紊乱等方面的研究 已有报道，其病理生理学意义主要体现在对体内胺类及肽类物质的储存、转运并 参与调节释放过程。鉴于SCG3广泛且特异的分布特征及特有的生物学功能，该 蛋白已经成为研究哺乳动物内分泌腺体及中枢神经系统分泌颗粒分布特征最具价 值的生物学标记，并对神经与精神疾病、神经内分泌肿瘤及其他代谢性疾病的诊 断、疗效及预后评估具有重要的临床指导意义。 物特异性，激活后能极为有效的水解维持细胞基本结构和重要功能的蛋白质，从 而诱导细胞凋亡发生。对caspase酶切底物的研究，将有助于阐明caspase依赖途 径致细胞凋亡的机制。研究caspaSe介导的凋亡细胞中SCG3基因与蛋白表达量变 化及其相关的分子机制，证实SCG3在细胞凋亡发生发展过程中所充当的角色， 有助于对其生物学功能深入研究并探究其参与PD发病的机制。以中国北方汉族 健康人群与PD患者血样为试验对象进行病例．对照研究，对sCG3基因编码区错 义突变及框移突变进行等位基因多态性调查，并研究单核苷酸位点与PD的相关 性，将为整体研究SCG3基因及其与神经系统疾病的相关性提供有价值的资料。 在多巴胺能神经元中，关于神经递质转运相关蛋白功能失调与PD关系的研 究尚不多见。因此，深入研究神经毒素对多巴胺能神经元以及神经递质转运相关 蛋白的作用，对于明确PD发病机制具有重要的现实意义。本实验选择具有神经 内分泌及神经元特性的SH．sY5Y细胞作为研究对象，以常用农业除草剂百草枯 (paraquat，PQ)做为外源性毒素，脑内正常神经递质DA做为内源性毒素，检 测SH．SY5Y细胞在两种不同神经毒素单独或联合诱导后细胞内pro．Casp．3表达变 化及可能的作用底物，深入研究神经毒素致多巴胺能细胞凋亡发生机制。研究在 细胞凋亡模型下SCG3基因及蛋白水平表达量变化及其相关的分子机制，证实 SCG3在细胞凋亡发生发展过程中所充当的角色，进而探究其参与PD发病的机制， 以期为PD的预防及有效治疗寻找新的靶点。 材料与方法 1、MTT法检测SH．SY5Y细胞经PQ和／或DA诱导后细胞增殖与存活率变化， 倒置相差显微镜下观察神经毒素诱导后细胞形态学改变； 的表达变化，分析神经毒素是否可通过caspaSe．3依赖的方式诱导细胞发生凋亡； mI醐A表达变化； 2 4、蛋白免疫印迹分析PQ诱导前后SH．SY5Y细