白粉菌诱导小麦叶片全长 cDNA文库的构建及质量评价.pdfVIP

一 38一 江苏农业科学 2015年第43卷第2期 卫晓静，王华忠，岳洁瑜．白粉菌诱导小麦叶片全长eDNA文库的构建及质量评价[J]．江苏农业科学，2015，43(2)：38—40 doi：10．15889／j．issn．1002—1302．2015．02．O11 白粉菌诱导小麦叶片全长eDNA文库的构建及质量评价 卫晓静 ，王华忠，岳洁瑜 (天津师范大学／天津市动植物抗性重点实验室，天津300387) 摘要：小麦 白粉病是由小麦白粉菌 (Blumeriagraminisfsp．Tritwi，Bgt)侵染引起的小麦 (TriticumaestivumL．)生 产上的主要病害之一 ，克隆小麦抗 白粉病相关基因并研究其生物学功能具有重要的应用价值和现实意义。以白粉菌 8gt侵染诱导的携带小麦抗白粉病基因Pm21(广谱抗白粉病基因)“92R137／扬麦 158’”为材料，利用SMART(switc— hingmechanismat5endoftheRNAtranscript)技术构建小麦叶片全长cDNA文库。结果表明，所获得的原始文库滴度 为 1．08×10CFU／mL，扩展文库滴度为3．24×10CFU／mL，重组率98％，插入片段在0．5～2．0kb之间，多在 1．0kb 左右。该文库的构建为进一步开展小麦抗 白粉病相关基因的克隆及分子生物学研究奠定基础。 关键词：小麦白粉病 ；cDNA文库；构建 ；质量分析 中图分类号：$435．121．4 6 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2015)02—0038—03 小麦 白粉菌 (Blumeriagraminisf．sp．tritici，Bgt)引起的 因 。姜宝杰等采用 SMART(switchingmechanismat5endof 小麦白粉病是世界上小麦主产区的主要病害之一…。白粉 theRNAtranscript)技术构建了花生受低温、干旱、各种激素、 菌通过侵染小麦的叶片部位，严重时侵染叶鞘、茎秆和穗部， 缺钙及黄曲霉等胁迫诱导的混合全长eDNA文库 ，用于花生 形成覆盖整个植株的霉层，可导致叶片早枯，光合作用降低， 抗逆基因的发掘 。本研究运用 SMART技术构建了白粉菌 呼吸作用加强，分蘖数减少，成穗率降低，千粒质量下降，可减 诱导的小麦叶片全长cDNA文库，并对文库质量进行初步鉴 产5％～10％，重病田减产可达 20％以上 。白粉菌生理小 定，为大规模表达序列标签 (expressedsequencetag，EST)测 种较多，常因基因重组和突变而产生具致病力的遗传变异，导 序，开展基因表达谱分析，克隆和鉴定一批小麦响应 白粉菌侵 致单一抗病性品种的抗病性易丧失 ，因此发现与利用新的抗 染的功能基因奠定了分子基础。 病基因，选育具有多个抗病基因聚合的持久抗病品种，从根本 1 材料与方法 上制定有效的抗病策略，为研究白粉菌诱导的特异基因的表 达提供了新途径。目前克隆抗病基因常用的方法有转座子标 1．1 试验材料 签法和图位克隆等方法，并已从拟南芥、烟草、玉米、水稻、小 供试 小麦材料为携 带广谱抗 白粉病基 因 Pm21的 麦、番茄、亚麻等植物中克隆得到 50多个抗病基因 』。但 “92R137／扬麦 158 ’。将小麦种子播种于盆钵中，罩以卷成 用转座子标签法分离抗病基因受到转座子的转化效率、突变 筒状的透明投影胶片，上覆3层滤纸，防止空气中白粉菌孢子 体产生后筛选的难易程度和突变体的表型是否稳定遗传等因 及其他杂菌落入 ，然后置于25℃人工培养箱培养(光照 16h／ 素的限制；图位克隆法前期工作量大、耗时长，准确性高，一般 黑暗8h)。以北方地区流行 的小麦 白粉菌 15号生理小种 只适合基因组小的物种采用。cDNA全长文库在研究具体某 E09为供试菌种，自粉菌在密植盆栽的感病品种苏麦3号上 类特定细胞中基因组的表达状态 以及表达基因功能鉴定