血红素蛋白和纳米雄黄相互作用的研究.pdfVIP

血红素蛋白与纳米雄黄相互作用的研究 韦静，沈星灿，梁宏’，金涛，叶丽屏 (广西师范大学化学化工学院，桂林，541004) 雄黄(Realgar)是我国一种传统矿物中药，其主要成分为As4S4，最早收载于《神农本草经》，距 今已有几千年历史。很多研究表明，雄黄可通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞DNA的合成、增强 机体的细胞免疫功能等多种途径发挥抗肿瘤作用，显示出广阔的应用前景。血红蛋l兰l(Hemoglobin， M，由四个亚单位组成。以血红素作 Hb)是血液中运输氧气的主要物质，相对分子质量约为67000 分子量为12384M，是一种含铁的血红素与蛋白质的共价结合体，由一条104个氨基酸残基组成的肽 链和一个与之共价相连的血红素基团组成。细胞色素C在生物体内被认为起着一种电子传递体的作 用。有关纳米雄黄与这两种蛋白质的相互作用未见报道。 本文运用紫外．可见吸收光谱(UV-vis)、荧光光谱、同步荧光光谱、圆二色光谱(CD)、傅立叶 变换红外光谱(Fr-m)及拉曼光谱等手段，研究牛血红蛋白(Bovine Hemoglobin，简称BHb)、马心 细胞色素C(Cytochrome C，Cyt-C)与纳米雄黄的相互作用。结果发现，血红蛋白的Soret带红移至 413nm，说明纳米雄黄可能使BHb发生了脱氧作用，氧合血红蛋白转变为脱氧血红蛋白。纳米雄黄 静态猝灭BHb的内源荧光，并扰动BHb芳香氨基酸残基所处的微环境。由UV-vis和荧光光谱的变 化，计算BHb与纳米雄黄的结合常数，其数量级达到109～1010。同步荧光光谱的结果表明纳米雄黄 扰动了色氨酸所处的微环境，使色氨酸残基所处的微环境亲水性增强。拟合计算远紫外圆二色光谱 的数据，结果表明纳米雄黄可诱导BHb的二级结构发生轻微的改变，旷螺旋含量增加。从FT-IR光 谱的分析可知，BHb中半胱氨酸残基的硫、羧基氧、酰胺及氨基酸残基中的氮原子与纳米雄黄可能 有表面键合作用。拉曼光谱的研究表明两者的结合使铁由低自旋转变为高自旋。通过血红蛋白氧溶 解饱和度的测定发现血红蛋白的载氧功能在与纳米雄黄作用后明显减小。 此外，Cyt-C分子中Soret带的吸收强度逐渐增强，峰位红移至414nin，说明Cyt-C与纳米雄黄 分析表明，纳米雄黄静态猝灭Cyt．C的内源荧光，扰动Cyt．C芳香氨基酸残基所处的微环境。由Uv-vis 和荧光光谱的变化，计算Cyt-C与纳米雄黄的结合常数，其数量级达到109～1010。同步荧光光谱中 色氨酸峰位的红移表明纳米雄黄扰动了色氨酸所处的微环境，使色氨酸的亲水性增强。拟合计算远 紫外圆二色光谱的数据，结果表明纳米雄黄可诱导Cyt-C的二级结构发生轻微的改变，a-螺旋含量 环境；Cyt-C中铁由三价变为二价，即Cyt．C由氧化态转变为还原态。拉曼光谱的分析表明纳米雄黄 使Cyt-C由氧化态转变为还原态，同时氨基酸残基的微环境受到扰动。 关键词：血红素；蛋白质；纳米雄黄；血红蛋白；细胞色素C；结合常数；相互作用；荧光猝灭： 紫外一可见吸收光谱；荧光光谱；同步荧光光谱；圆二色光谱；傅立叶变换红外光谱；拉曼光谱。 参考文献 G R—玎Structuralfrom 【l】Kenton Su，ShankaxSubramaniam，Thomas R．Rodgers，Chang Spiro．Hemoglobin Dynamics Simultaneousof and Tune-ResolvedUVResonaceRaman MonitoringTyrosine Signals[J]．J．Am．Chem． Tryptophan Soc．1992(114)：3697—3709． Am Chem 【2】S．Hu，K．M．Smith，’r．GSpiro．J Soc，1996(118)：12