毛细管电泳技术用于杆菌肽发酵过程中氨基酸代谢地研究.pdfVIP

2006年11月 第七届全围毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 龟细管电泳技术用于杆菌肽发酵过程中氨基酸代谢的研究 林纲，赵文杰，蒋家琛，程晴华 (上海医药工业研究院，北京西路1320号，上海200040) 摘要：应用毛细管电泳技术监测了杆菌肽发酵过程中游离氨基酸含量的动态变化，以此为基础 分析了菌体的部分代谢流方向和规律，即在高浓度有机氮源的发酵培养基中，菌体代谢的EMP途径 中从3-PG向PEP转化过程的抑制被解除，这种变化有利于提高杆菌肽的发酵效价。此外添加适量外 源Lys，可能会促进发酵前期菌体细胞的TCA循环通量，从而提高发酵效价。 关键词：毛细管电泳；杆菌肽：氨基酸；代谢； 目前作为世界上销量最多的饲料添加剂专用抗生素而得以广泛应用。近年来，随着代谢流概念的提 出和发展，氨基酸[1，21、有机酸、糖等中问代谢产物的分析检测已经成为微生物发酵的重要研究内容， 但CE技术在这方面的应用国内尚未见报道。本文应用CE技术对杆菌肽发酵过程中胞外游离氨基酸的 含量及其变化情况进行了研究，并对菌体的代谢过程进行了初步分析。 l仪器与试药 P／ACETM MDQ和32 品(66u／mg)。 2方法 2．1菌种 Bacillus 9023—14(实验室保存)。 licheniformis 2．2培养基与培养条件 淀粉1．0，CaC03 种子培养基(％)：黄豆饼粉2， O．5。pH 0．001。 0．002，MnS04 0．1，CaC030．6，MgS04 发酵培养基(％)：豆粕10．0，淀粉4．0，(NH4)2S04 pH6．8，接种量5％，37。C，220rpm振荡培养48h。 2．3氨基酸的测定方法【3】 见参考文献[3]。 3结果 3．1杆菌肽发酵过程中氨基酸的时序变化 明显的两种。 3．2天然有机氮源与氨基酸代谢的关系 50 2006年11月 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 以豆粕(A)、 按2．2进行培养，测定发酵终点时的效价和游离氨基酸含量，结果见表l。 表1氮源与发酵液巾氨基酸及Ba产量的关系 A、C两组培养基的氮源浓度达到10％时，Ba的产量最高，同时发酵液中的主要氨基酸包括Tyr、 中游离氨基酸的85％以上为Cys。 合成的TVr、Phe和Trp等芳香族氨基酸含量也随之显著增加，相应地Cys仅微量存在。 3．3外源Lys对杆菌肽发酵的影响 配制A、B、C三组发酵培养基，以A组为对照，在B、C组中分别加入外源性的Lys0．02mg／ml 代谢能力加强。此外，Tyr和t,ys的检出时间与对照组相比均有明显提前，这同样表明在发酵前中期 无论是TCA循环、还是EMP途径都得到了加强。 实验结果显示，促使效价提高原因并不是因为后期发酵液中存在较多的Lys，作为前体物质 被利用：而是由于Lys的添加，可能刺激了发酵前期菌体细胞的初级代谢速度，从而使得前期效 价提高。 4结语 对杆菌肽发酵过程的代谢分析表明，CE技术应用于氨基酸分析能提供与菌体代谢相关的许 多有益信息。通过对发酵液中游离氨基酸进行时序分析，并辅以有机酸，ATP等其他中间代谢 产物的检测分析，能够更明确的揭示微生物细胞在发酵过程中所处的代谢通路，以及限制目的 产物高产的某些因素，因此CE技术应用于多肽类生物活性物质如谷胱苷肽、多粘菌素E和B， 杆菌肽A，乳酸链球菌素，替考拉宁，环孢菌素等品种的发酵代谢流研究将有着广阔的前景。 参考文献 amino