生物分离与纯化技术 教学课件 作者 邱玉华 主编 第四章.ppt

尚辅网 尚辅网 第4章 色谱技术 第1节 概述 学习目标： 1．熟悉色谱分离技术的概念和色谱系统的组成。 2．掌握色谱分离技术的分类。 3．了解色谱分离技术的特点和应用。 第1节 概述 一、色谱分离技术的概念 二、色谱分离系统的组成 三、色谱分离技术的分类 四、色谱分离技术的特点 五、色谱分离技术的应用 一、色谱分离技术的概念 色谱分离技术是一类相关分离方法的总称。利用不同组分在两相中物理化学性质（如吸附力、分子极性和大小、分子亲和力、分配系数等）的差别，通过两相不断的相对运动，使各组分以不同的速率移动，而将各组分分离的技术，称为色谱分离技术。 二、色谱分离系统的组成 色谱分离系统都须包括两个相：一相为表面积较大的固体或附着在固体上且不发生运动的液体，称为固定相；固定相能与待分离的物质发生可逆的吸附、溶解、交换等作用，它是色谱的一个基质，对色谱分离的效果起关键作用；另一相是不断运动的气体或液体，称为流动相（又称展层剂、洗脱剂）；它携带各组分朝着一个方向移动，也是色谱分离中的重要影响因素之一。当流动相流过固定相时，易分配于固定相中的物质随流动相移动的速度较慢，易分配于流动相中的物质随流动相移动的速度较快，使不同组分发生差速迁移，从而实现逐步分离。 三、色谱分离技术的分类 根据分离时一次进样量的多少，色谱分离可分为色谱分析（l0mg）、半制备或称中等制备规模（10～50mg）、制备或称样品制备（0.1～l0g）和工业生产规模（20g）。制备和工业色谱主要是采用以液相为流动相的柱色谱，要求色谱柱应大些，进样量应多些，以便分离和纯化较多的产品，但色谱峰高和保留值等参数不能作为定性、定量分析的指标。 根据流动相的相态不同可分为气相色谱、液相色谱和超临界流体色谱；根据固定相形态不同可分为纸色谱、薄层色谱和柱色谱；根据操作压力的不同可分为低压色谱（0.5MPa）、中压色谱（0.5～4.0MPa）和高压色谱（4.0～40MPa），其中，中、低压色谱多用于分离纯化过程；根据流动相的流向不同可分为轴向流色谱和径向流色谱；根据分离机理的不同可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等；根据操作方法的不同可分为洗脱展开法、前沿分析法和置换展开法。 四、色谱分离技术的特点 色谱分离技术具有分离效率高、应用范围广、选择性强、分离速度快、操作条件温和、高灵敏度的在线检测、操作方便等优点，适用于各种物质的分离。其缺点是处理量小，操作周期长，不能连续生产。 五、色谱分离技术的应用 色谱分离技术主要应用于物质的分离纯化、物质的分析鉴定、粗制品的精制纯化和成品纯度的检查等。色谱分离首先应用在分析检测中，具有较高的分辨率。色谱分离应用于药物和生物物质的分离纯化过程中，称为制备色谱或色谱分离技术，但色谱分离的规模还是相当小的。色谱分离技术已逐渐发展成为药品和生物产品高度纯化的重要手段之一。 第2节 吸附色谱分离技术 学习目标： 1. 熟悉吸附色谱分离技术的概念、分类、特点及其应用。 2. 掌握吸附色谱分离技术常用的吸附剂和展开剂及其选择方法。 3. 掌握薄层吸附色谱和吸附柱色谱分离操作。 4. 了解吸附色谱分离技术常用分离设备。 第2节 吸附色谱分离技术 一、吸附色谱分离技术 二、吸附色谱分离操作及其设备 三、吸附色谱技术的应用 一、吸附色谱分离技术 1.吸附分离原理 2.吸附剂与展开剂 3.影响吸附分离的因素 1.吸附分离原理 吸附色谱技术是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的方法。吸附力主要是范德华力，有时也可能形成氢键或化学键。吸附法的关键是选择吸附剂和展开剂。 当混合物被流动相带入色谱柱并在柱中移动时，由于各组分在固定相中的分配系数或溶解、吸附、交换、渗透或亲和能力的差异，使各组分随流动相移动的速率不同。因此当流动相移动一定柱长后，使各组分在色谱柱内分层，从而达到各组分分离的目的。 1.吸附分离原理 图4-1中，混合液中各组分对固定相的吸附能力的大小次序为：白球分子○黑球分子●三角形分子△。将三种组分的混合物加入色谱柱的顶端[见图4-1（a）]，然后加入流动相，在重力或压力差的作用下，流动相向下移动，各组分在两相间不断地发生吸附、解吸、再吸附、再解吸……的过程，连续多次的吸附平衡过程是吸附色谱分离的基础。如果各组分与固定相的吸附力相同，则各组分以相同的速率随流动相一起向下移动，而不能被分离。如果混合物中各组分与色谱柱中固定相的吸附力大小不同，通过在柱中反复多次地吸附和解吸，使各组分间不断地发生差速迁移[见图4-1（b）～（g）]，最后，作用力最弱的“△”分子随流动相的移动速率快，最先从色谱柱中流出[见图4-1（h）]，中等吸附力的“●”分子在中间流出，吸附力最大的“○”分子最后从柱中流出，