上海地区137例人类血小板抗原基因地多态性研究.pdfVIP

上海地区137例人类十血小板抗原基因的多态性研究 刘建军1 李志强1水 随着血小板制品临床应用的日益广泛，血小板输涟过程中所产生的问题也明显增多。入类血小板 抗原(humanplatelet 人类照小板上有红细胞部分血墅系统、HLA—l类抗原朔人类血小板抗原，詹者称为斑小板特舅性抗原 疫性血小板减少性紫癜(NAITP)、免疫性』衄小板减少症、移植相关的免疫性血小板减少症等【2]。现 和濮化，也怒动脉盎捡形成的主要原因之一。瘟小板骥糖蛋白的基因多态性使其表型发生变化，从嚣 影响血小板膜糖蛋白的功能。本研究采用序列特异性引物SSP—PCR方法对上海地区137名健康成年 人进行HPAHPA一1—16抗原系统32个等位基因进行检测分析，对其基因频率及其基因型频率进行统 计学处理，进i}|l根据分布频率来琰溯盘小援阕种免疫发生翡可熊性，确定有临床意义的蛊小扳抗原系 统，为快速地寻找更合适的血小板输注给患者提供实骏依据。 材料和方法 研究对象 ，，， 随机抽取137名上海本地无m缘关系的健康成年人静脉血2ml，EDTA抗凝。 主要仪器和试荆 德国BMS公司XPPCR扩增仪；美国GT公司的人类血小板抗原HPA1—16基因分型试剂盒；美 DNA聚合酶：Beckman低温高速离心机。 国Promega公司的Taq DNA制胬 应用德圜BMS公葡人类基因组DNA抽提试剂盒，采用盐析法取500ulEDTA抗凝外周血，按说明 书操作，最后将DNA溶于皿缓冲液，一20℃保存备用。 PCR扩增 每孔加PCR 红，PCR反应缓冲液，1．5mM DNA聚 合酶(O。4u)。总反应体积9ul。 扩增条件 预变性950C5分钟后，进行95℃30秒，60。C 钟，4℃保存。 扩增产物电泳 取7ul扩增产物，狂2％的琼脂糖凝胶上点样，10电泳30分钟，自动凝胶图象分析仪下观察电泳 结果。 电泳结聚判读 ·96· 增成功，在相应碱基对位置观察有无特异性条带出现，如果出现特异性条带判读为阳性如果没有出现 特异性条带判断为阴性。 统计分析 基因频率按群体遗传基因计数法计算。计算x2值，比较基因型分布的期望值和观察值，验证是否 11．0进行数据处理比较不同人群基因频 符合HaZy—Weinberg(HW)平衡法则，用统计学软件SPSS 率分布的差异性。 结果 0． 和HPA一15的基因频率分别为HPA—la0．9854，HPA一1b0．0146，HPA一2a0．9453，HPA一2b 0．4489，HPA一4a 0． 0547，HPA一3a0．5511，HPA一3b 0．9964，HPA～4b0．0036，HPA一5a 0． 9891，HPA一5b0．O109，HPA一6a0．978l，HPA一6b0．0219，HPA一15a0．5292，HPA一15b l， 1例HPA一2b／b纯合子基因型(见图7)，没有发现HPAl、4、5、6b／b纯合子基因型。HPA一7一14 由于HPA基因分型技术的发展，各个人群l—16系统的报道不完整，多态性集中表现在HPA一1 —6、和15系统，故选取这部分数据与之进行比较(见表2、3)。本研究结果与孙国栋等[4]调查的 意义(P0．05)。 讨论 上的6个遗传位点，由常染色体双等位基因以共显性模式控制，其基因多态性除HPA一14bw外，绝大