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血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的实验研究 _医学论文 血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的实验研究 _医学论文 作者：张建鄂, 罗昌霞, 张庆红, 李涛 　[摘要] 目的:研究血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的机制。 方法:血管紧张素Ⅱ（10-7 μmol/l）加入肾小管上皮细胞为对照组；体外培养的肾小管上皮细胞作为空白对照；不同浓度缬沙坦（10-6 μmol/l、10-7 μmol/l、10-8 μmol/l、10-9 μmol/l）先与肾小管上皮细胞共同培养半小时后再加入血管紧张素Ⅱ（10-7 μmol/l）为干预组；EMSA、RT-PCR分别检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达。 结果:血管紧张素Ⅱ可诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加，骨桥蛋白mRNA表达上调；而不同浓度缬沙坦干预组检测结果显示NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下调。 结论:血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤与导致肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加、骨桥蛋白mRNA转录上调有关。这一过程可能依赖血管紧张素ⅡⅠ型受体。 　　[关键词] 血管紧张素Ⅱ肾小管上皮细胞核转录因子-κB骨桥蛋白 　　Abstract： Objective To explore the mechanism of angiotensinⅡinducing the injury of proximal tubular cells. Methods Cultured cells were incubated with AngiotensinⅡ（10-7 μmol/l）as the control cultured cells were incubated with different concentration Xiesartan for half an hour and then with angiotensinⅡ（10-7μmol/l） as the intervention group proximal tubular cells without stimulation as blank control EMSA, RT-PCR were used to observe NF-κB activity and OPN mRNA expression in different periods,respectively. Results AngiotensinⅡcould increase NF-κB activity and upregulate OPN mRNA expression in proximal tubular cells.While Xiesartan could decrease NF-κB activity and downregulate OPN mRNA expression in angiotensinⅡ stimulated proximal tubular cells. Conclusion The mechanism of angiotensinⅡ inducing the injury of proximal tubular cells is related to increase NF-κB activity and upregulate OPN mRNA expression,and this process is angiotensinⅡ receptorⅠ dependent. 　　Key words: AngiotensinⅡ Proximal tubular cell NF-κB OPN 　　近年来，肾脏局部肾素―血管紧张素―醛固酮系统（RAS）在慢性肾脏病的发生、发展中的重要作用越来越受到人们的关注。RAS的主要效应因子血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ）已发现与许多肾脏疾病的发生、发展过程密切相关。但血管紧张素Ⅱ能否诱导小管上皮细胞损伤及其具体机制不明。本课题通过体外实验用一定浓度血管紧张素Ⅱ刺激肾小管上皮细胞，观察核转录因子、细胞因子的变化，探讨血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的可能机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂及仪器测定NF-κB活性的EMSA试剂盒（promega公司）；血管紧张素 Ⅱ（sigma公司）；RT-PCR试剂盒（BD Bioscience公司）；TRIZOL（GiBco公司）；RNaseA抑制剂（Novagen 公司）；引物（上海生工生物工程技术公司）；大鼠的肾小管上皮细胞株(NRK细胞)购至中科院上海细胞库；冷冻离心机（Biofuge公司），二氧化碳温箱（Forma scientific公司）。缬沙坦由北京诺华公司提供。 　　1.2 细胞培养无菌条件下大鼠肾小管上