巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性.pdfVIP

第65卷第1期 化工学报 V01．65No．1 2014年1月 CIESCJournal January 巯基微球协助重组丫一猪肝酯酶包涵体 一研一 一究一一论一…文一 体外复性 黄寿锟，关怡新，于洪巍，姚善泾 (浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江杭州310027) 摘要：猪肝酯酶(PLE)是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶。大肠杆菌异体表达为大规模生产猪 肝酯酶v同工酶提供了可能，但表达过程中会形成包涵体，需经体外重折叠恢复其生物活性。针对7-PLE含二硫 键的特点，制备了三种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG—DTT(6．1 I_tmol·g～、25．2pmol·g_1和143．4gmol·g“)， 将其应用于协助7-PLE包涵体体外复性，并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响。复性过程 需要适宜的氧化还原环境，较高的巯基负载量微球协助复性效果较好，当7-PLE浓度为1000gg·ml_1时，微球协 U·L，比对照组提高了72％。研究表明，巯基微球能有效促进二硫键的正 助复性后7-PLE的活性可达到1885 确配对，阻止蛋白分子间的聚集，是一种新型高效的复性添加剂。 关键词：生物分离；蛋白质复性；聚集(作用)；二硫键；巯基微球；重组Y．猪肝酯酶 DOh 157．2014．01．040 10．3969／j．issn．0438—1 028．8 文献标志码：A 中图分类号：TQ ofrecombinantliveresteraseinclusionbodies／nvitroassisted Refolding pig by latex thiol—carryingparticles HUANG Shoukun，GUANYixin，YU Hongwei，YAOShanjing and 31 (DepartmentofChemicalBiologicalEngineering，Zh巧iangUniversity，Hangzhou0027，Zhejiang,China) liver been usedin askinetic esterase(PLE)haswidely manyfields，such resolutions， Abstract：Pig of ofnucleosides．Recombinantofthe desymmetrizationssubstrates，andsynthesis prochiral expression of EscherichiacolicanavoidtheundesirableofseveralPLE in 7-isoenzymePLE(7-PLE)in