抗SARS-CoV卵黄免疫球蛋白IgY的制备的探究.pdfVIP

抗SARS—CoV卵黄免疫球蛋白IgY的制备研究+ 彭运平1 吴军林2 王继华1 何小维3 李文美1 510640 (1华南理工大学万孚生物技术有限公司广州I 2中国科学院南海海洋研究所 广州5103013华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640) 【摘要】 目的用SARS—CoY抗原免疫鸡后纯化制备卵黄免疫球蛋白的方法。方法：卵黄液一20℃ 低温冻融后两步硫酸铵沉淀，并O．02MpH7．0TrJs透析。结果：从还原SDS电泳图可以看出。经 过上述方法纯化的IgY纯度高，重链65KD，轻链30KD左右。同时，每个卵黄中我们可以获得1 28mg～ 结论：该方法从卵黄中可以获得大量的抗体，且制备简单、方便，抗体效价高、 150mg的特异性抗体。 纯度高，适合大规模生产抗体。 【关键词】卵黄免疫球蛋白，纯化，SARS—CoV 卵黄免疫球蛋白IgY具有纯度高，含量大；不结合类风湿因子(RF)；不激活补体；与哺乳动物 IgG无交叉反应；同时国内外研究表明IgY多抗效价很高。基于IgY抗体的优点，本研究首次尝试利 用卵黄制备抗SARS—CoV的IgY抗体，将卵黄抗体作为被动免疫制剂，期望口服后使人能够具有SARS 免疫力，起到预防SARS的作用。 Igy的分离纯化主要困难是如何有效的除去高浓度存在于卵黄中的脂类。目前已经建立的IgY分离 提纯方法，主要过程是去除脂类、分离IgY，浓缩终产物。包括polson等…首先提出了聚乙二醇(PEG) 方法使用便利性及大规模制备的可能性等方面各有优缺，不能满足实际大规模生产和运用的需要。 的WD法、PEG法，DS法和黄原胶法(Xan法)，更适合IgY大规模制备与生产。 1．材料与方法 1．1材料 1．1．1 SARS—CoV重组抗原购自中科院病毒研究所。 1．1．2实验动物农科院畜牧所岭南黄鸡1．5kg。 1．1．3饲料 农科院畜牧所岭南黄鸡专用饲料。 1．1．4鸡蛋 收集岭南黄鸡所产鸡蛋。 作者简介： 彭运平，女，(1977一)硕士，广州万孚生物技术有限公司开发部经理； 联系电话：0200)Email：pyp@wondfo．com．cn 广东省防治非典型肺炎科技攻关(粤科企) 5014) 国家高技术研究发展计划(863计划)项目子课题(项目编号：2002AA21 ·———434‘。—— 1．2方法 I．2．1卵黄的收集方法 磕开蛋壳，将蛋黄与蛋清分开，用纯化水反复冲洗蛋黄，尽可能除去卯清；将完整蛋黄置于漏斗 内，刺破蛋黄膜，收集其无膜蛋黄液并计算体积； 1．2．2放置方式的影响 取鸡蛋一枚，按上述同样的方法处理鸡蛋，以7倍体积的双蒸水对蛋黄进行稀释，以0．1N的HCL 上。稀释液10，000rpm，4。C离心30min，保留上清用folin酚法测定上清液中的蛋白含量 1．2．3稀释倍数的影响 取鸡蛋一枚，按上述同样的方法处理鸡蛋，用ddH：0按不同的比例对蛋黄液进行稀释，稀释比例 1．2．4盐离子强度的影响 取鸡蛋一枚，按上述同样的方法处理鸡蛋，以7倍体积的双蒸水对蛋黄进行稀释，以0．1N的HCL 离心30min，保留上清用folin酚法测定上清夜中的蛋白含量。 1．2．5 pH值对IgY活性的影响 取鸡蛋一枚，按上述同样的方法处理鸡蛋，以7倍体积的双蒸水对蛋黄进行稀释，测定稀释液的 为2．0—12．0不等。 中蛋白的含量以及ELISA法检测I“的活性。 1．2．6卵黄抗体IgY纯度的初测 酰胺电泳，以低分子量Marker作为对照。 2。结果 2．1放置方式的影响 实验中我们比较了两种不同的放置方式对纯化效果的影响，如表1和图l。 表3．3不同放置方式对纯化结果的影响 Table3·3TheTheeffectofdifferentfor