生物大分子超微结构研究中的原子力显微术.pdfVIP

综述 生命科学仪器 2011第9卷／8月刊 生物大分子超微结构研究中的原子力显微术 朱杰 ， 郭连红 张诗音 王霖 王国栋 (1．西北农林科技大学理学院生物物理研究所心血管再生研究组 ，陕西杨凌712100； 2．吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室，吉林 长春 130012； 3．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100； 4．中南大学公共卫生学院，湖南长沙410078；5．西北农林科技大学 创新实验学院，陕西杨凌712100) 摘要 原子力显微镜作为第三代显微探测工具，具有原子级的空间分辨率，其样品制备方法简单易行，可在离体的近生 理条件下直接观测生物样品及其动态变化过程 ，能够对样品进行力学操纵 ，在观察生物大分子的结构和生物力学特性 上具有显著的优势。本文尝试从蛋白质、核酸、多糖的超微结构和力学特性的研究角度人手，期望向读者展现出原子 力显微镜在大分子生物学研究中的应用前景。 关键词 原子力显微镜 ；生物大分子；超微结构；生物力学 中图分类号：Q66；Q71 文献识别号：A 刖 吾 究条件不成熟等因素，以前对膜蛋 白结构的认识较 少 ，AFM的出现为膜蛋白结构的认识提供了先进手 1986年，斯坦福大学的BinnigG等人发明的原子 段。蛋 白质分子在脂膜上有规律地排列甚至形成二 力显微镜 (AtomicForceMicroscope，AFM)的放大倍数} 维晶体，均适合于用AFM研究f2]。低信噪比的AFM 远远超过以往的任何显微镜 ]。光学显微镜(Optical 可用来来检测膜蛋白的原子结构 ，高信噪比的AFM Microscopy，OM)的放大极限仅为10倍，电子显微镜 则可直接对膜蛋 白在纳米级分辨率清晰成像；特殊 (ElectronicMicroscopy，SEM／TEM)的放大极限也只有 信噪比的AFM可使膜蛋 白在接近生理状态下成像， 106f~，而AFM的放大极限则高达l0倍 ，在观察生物 水平分辨率达到0．5～1nm。垂直分辨率可达0．1～ 大分子的结构上具有很大的优势。另外 ，作为 目前 0．2nm。随着AFM探针技术的发展，最近对蛋 白的研 生物医学超微结构研究最常用的工具，SEM／TEM成 究已达到可以同时对多种参数进行计量和测算的程 像要求对生物样品进行固定、脱水、包埋 、切片、 度。游离蛋白不易在载体上被固定，其成像质量往 染色或镀金等一系列繁琐处理；而AFM则可在大气 往不及膜蛋白，但AFM还是能够比较成功地观察肌 或溶液中直接观测生物样品及其动态变化过程。除 动蛋白、血纤维蛋白原、免疫球蛋白等游离蛋 白分 此以外，AFM通过控制并检测针尖～样品之间的相 子。如对肌动蛋 白的观察 ，早期用AFM获得的图像 互作用力，可以分析研究与作用力相应的各种表面 中可看到5nm高隆起的肌动蛋白分子结构，随着探 性质：采用最新的Tapping技术和Phase技术可以测试 针技术的不断发展，逐步观测到了肌动蛋 白分子的 样 品的硬度和弹性等力学特性 ；AFM可对生物大分 螺旋构造 ，现今用轻敲模式不仅观测到70nm长的D 子进行力学操作。总体上，AFM拥有原子级的高分 带区，就连区内的亚结构也能观察。通过AFM对肌 辨率 ，可以观察活的生物样品，能够对样品进行力 动蛋白聚合、解聚、破裂、弹性系数变化等过程的 学操纵 ，这些特性使AFM在生物大分子超微结构与 观察，证实了肌动蛋 白的网络结构对活细胞稳定性 生物力学研