大黄酚对β淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用_临床医学论文.docVIP

大黄酚对β淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用_临床医学论文 大黄酚对β淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用_临床医学论文 作者：武海霞 张丹参 张力 安芳 薛贵平 王树 【摘要】 目的 研究大黄酚对凝聚态β淀粉样蛋白25～35(Aβ25～35)致小鼠学习记忆障碍的改善作用,探讨其可能的作用机制。方法 采用一次性小鼠右侧脑室注射Aβ25～35 3 μl造成学习记忆障碍动物模型，应用避暗实验、Morris水迷宫实验观察大黄酚(0.1，1.0,10.0 mg/kg)腹腔内注射对Aβ25～35模型鼠记忆障碍的改善作用，并于侧脑室注射后17 d测定各组小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果 单侧侧脑室一次注射Aβ25～35 3 μl可引起小鼠学习记忆障碍，同时使脑组织NO含量增加和NOS、iNOS活性升高(0.01);而大黄酚(0.1，1.0，10.0 mg/kg,ip，17 d)可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍，并降低脑组织NO含量及NOS、iNOS活性(0.01)。结论 侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍，而大黄酚可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导，改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍。 【关键词】 大黄酚;β淀粉样蛋白;学习记忆;阿尔茨海默病;一氧化氮;一氧化氮合酶 近年，越来越多的研究发现β淀粉样蛋白(Aβ)在脑内沉积形成老年斑(SP)是阿尔茨海默病(AD)的发病基础〔1〕。以往实验表明大黄酚可抑制大鼠肝、脑过氧化脂质的生成〔2，3〕，对急性衰老小鼠记忆障碍有保护作用〔4〕，但其能否改善Aβ25～35所致的学习记忆障碍，尚未见报道。本研究通过Aβ25～35致小鼠记忆障碍并观察大黄酚的改善作用并探讨可能的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 昆明种小鼠,雄性，体重(20±2)g，鼠龄6 w，中国科学院药物研究所动物实验中心提供，(动物批号：SCXK京2004。分笼饲养，自由吃食和饮水，室温(20±2)℃。 　　1.2 药品和试剂 大黄酚(纯度gt;98%)，辽宁生物制药研究所提供，用N，N二甲基甲酰胺溶解，吐温助溶，生理盐水(NS)稀释成所需浓度;Aβ25～35，购自美国Sigma公司，将1 mg Aβ25～35溶于1 ml无菌生理盐水中，密封后置于37℃培养箱中孵育1 w，使其变为凝聚状态的Aβ25～35〔5〕，-20℃保存。 　　1.3 主要仪器设备 Morris水迷宫装置，中国医学科学院药物研究所;SBA程控避暗箱，中国医学科学院药物研究所;721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司;FSH内切式组织匀浆机，江苏环保仪器厂;80离心机，上海安亭科学仪器厂;S648型恒温水浴箱，上海医疗器械七厂。 　　1.4 动物分组和给药 小鼠100只，随机分成5组：对照组，Aβ25～35模型组，大黄酚0.1、1.0、10.0 mg/kg组，每组20天。第1天，对照组侧脑室注射(icv)NS 3 μl，其他各组icv Aβ25～35 3 μl〔6〕。icv后立即ip大黄酚0.1、1.0、10.0 mg/kg，对照组、Aβ25～35模型组ip溶剂10 ml/kg;2～17 d，各小鼠每天ip一次;8～17 d，各小鼠每天ip后60 min开始各项实验。 　　1.5 学习记忆行为学实验 　　1.5.1 避暗实验 icv后8 d，将小鼠背向洞口放入明室，同时启动程控避暗箱自动记录装置，记录180 s内小鼠进入暗室的潜伏期和错误次数，以各组小鼠进入暗室的只数与各组小鼠总只数的比值作为各组错误百分率。24 h后以同样方法记录180 s内小鼠错误次数、潜伏期和错误百分率，测验记忆成绩。 　　1.5.2 Morris水迷宫实验 Morris水迷宫实验装置由一个不锈钢的圆柱形水池和一个可移动的圆柱形透明有机玻璃站台组成。水池直径120 cm，高50 cm，站台直径12 cm，高24 cm，水深25 cm，水温控制在(23±0.5)℃。水池均等分为4个象限，站台置于第一象限。水池上方的摄像机全程跟踪小鼠的活动，计算机记录小鼠找到站台潜伏期、游泳路径长度和搜索策略。①隐藏平台获得实验〔7〕icv后11～15 d，每只小鼠连续训练5 d，每天4次，每次采用不同的入水点训练120 s。训练时将小鼠面朝池壁轻轻放入水中，同时启动记录装置，小鼠找到站台后，让其停留20 s;若小鼠120 s内未找到站台，则将其放于站台上站立20 s，取下休息120 s后进行下一次训练。记录120 s内小鼠寻找站台的潜伏期、游泳路径长度及所采取的搜索策略。②空间搜索实验〔8〕icv后16 d，将可移动的站台从水池中取出，水深