大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用_临床医学论文.docVIP

大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用_临床医学论文 大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用_临床医学论文 作者：王树 张丹参 张力 安芳 薛贵平 武海霞 【摘要】 目的 研究大黄酚对脑缺血再灌注(I/R)小鼠记忆功能的保护作用及其机制。方法 采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑I/R损伤模型，进行穿梭实验，观察大黄酚(10.0、1.0、0.1 mg/kg，腹腔注射)对脑I/R小鼠记忆功能的保护作用，并对各剂量组脑组织和血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH、超氧化物歧化酶(SOD)活力进行测定，以及小鼠亚硝酸钠中毒缺氧后存活时间的测定。结果 大黄酚可明显改善脑I/R损伤所致的记忆障碍，增加GSH、SOD活力，延长缺氧后存活时间。结论 大黄酚对脑I/R损伤小鼠记忆功能有保护作用，其作用机制可能是通过增强GSH、SOD活力，提高脑组织对氧自由基的清除能力，从而减轻I/R引起的脑组织损伤。 【关键词】 大黄酚;脑缺血再灌注;学习记忆;谷胱甘肽过氧化物酶;超氧化物歧化酶;缺氧 以往研究证明，大黄酚可显著抑制大鼠肝、脑组织过氧化脂质的生成，具有抗衰老作用〔1〕。但大黄酚对脑缺血再灌注(I/R)记忆功能的影响，尚未见报道。本实验旨在采用改进的Himori法〔2〕暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑I/R损伤模型，研究大黄酚对脑I/R小鼠记忆功能的保护作用，探讨其对脑I/R损伤后记忆功能的保护作用机制，为其应用于临床治疗血管性痴呆疾病提供理论和实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 昆明种小鼠，体重 (28±2)g，均为雄性，由中国医学科学院药物研究所动物实验中心提供〔许可证号：SCXK(京)2004〕。 　　1.2 主要药品、试剂和仪器 大黄酚(纯度≥98%，批号110796，中国药品生物制品检定所)，实验前用N，N二甲基甲酰胺溶解，聚山梨酯助溶，生理盐水稀释至所需浓度，N，N二甲基甲酰胺∶聚山梨酯生理盐水的比例为1∶1∶8。谷光甘酞过氧化物酶(GSH活力测试盒，超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(南京建成生物工程研究所);亚硝酸钠(NaNO2)(天津市化学试剂一厂)。XCS小鼠穿梭程序自动控制仪(中国医学科学院药物研究所);753BI微机型紫外可见分光光度计(上海光学仪器制造厂);Forma冰柜(-80℃，美国热电公司);Sigma3K30高速冷冻离心机(德国Sigma公司)。 　　1.3 方法 　　1.3.1 小鼠脑I/R模型的制备 在Himori法〔2〕基础上进行改进。3.5%水合氯醛(10 ml/kg,腹腔注射)麻醉小鼠后，仰卧位固定，自胸骨柄到下颌骨间行5～8 mm正中纵向切口，分离两侧颈总动脉，分离后用液体石蜡浸泡过的黑色手术线穿过左右二侧颈总动脉，尽量恢复两侧颈总动脉到原位，在气管上方轻轻将黑色手术线打一松的反手结，结的松紧以不压迫气管为宜。在每侧颈总动脉上方的黑线上穿过一条用液体石蜡浸泡过的白色手术线，按Himori法埋线后缝合切口。术后48 h将颈下部黑色手术线拉紧,阻断两侧颈总动脉造成大脑缺血状态，5 min后轻拉两侧白色手术线，使颈总动脉恢复血液再灌注。 　　1.3.2 动物分组及给药 每项实验均取小鼠70只，手术后48 h将小鼠随机分为5组，假手术组(进行手术，但不进行脑I/R)、I/R模型组(模型组)、药物组(模型+大黄酚);药物组分高、中、低剂量组，于缺血前30 min分别腹腔注射大黄酚10.0、1.0、0.1 mg/kg，模型组于缺血前30 min 腹腔注射溶剂10 ml/kg，假手术组腹腔注射溶剂10 ml/kg。 　　1.3.3 穿梭实验 XCS小鼠穿梭程序自动控制仪，底部为不锈钢栅，栅间距为0.5 cm，加非条件刺激时有电流通过，电击动物足底。顶部配置有噪声发生器(铃声刺激)，用来产生条件刺激。在安静环境中，每天8:00～12:00进行实验，室温(22±2)℃。程序设置为：蜂鸣5 s，继之电刺激15 s，间隔15 s,而后重复上述程序,如此循环20次。电脑将自动记录小鼠遭受电击次数、电击时间及主动逃避时间等参数，以评价小鼠的学习记忆能力。每次实验测试前先把小鼠放入穿梭箱中，让小鼠在箱内自由活动5 min，以消除其探究反射。然后正式进行学习穿梭训练，记录小鼠被电击次数、电击时间和主动逃避时间。除假手术组外，其余各组于训练后使脑缺血5 min，然后恢复血流。24 h后测试记忆成绩。 　　1.3.4 小鼠全血、脑组织GSH和血浆、脑组织SOD活力测定 除假手术组外，其余各组均于48 h后立即缺血5 min，然后恢复血供后10 min，将小鼠的颈动脉切开取血,肝素抗凝，并快速断头取其脑组织置于Forma冰柜内冷冻贮存。将抗凝全血用三蒸水制成1%溶血液，并将脑组织制成10%脑匀浆。以G