GMA-NVP-MBAA三元聚合物载体固定化青霉素酰化酶性能地研究.pdfVIP

第42卷第3期 复旦学报(自然科学版) V01．42No．3 型!堑!旦 !!竺!!!!!!!!!坚竺丝!!型!竺竺竺皇 !!!：!!!! 文章编号2003)03-0438-02 青霉素酰化酶·眭能的研究 薛屏1’2，卢冠忠1，郭杨龙1，王筠松1，郭耘1 (1华东理工大学工业催化研究所，匕海200237；2宁夏大学化学与化工学院，银川750021) 摘要：利用反相悬浮聚合技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯．N乙烯毗咯烷酮一N，N7亚甲基双丙烯酰 的GNM(50)固定青霉素酰化酶，固定化酶水解青霉素G钾盐活性达491 U／g固定化酶经4次使用后活性达到 稳定值为444 U／g，再经14次使用，活性几乎不变同时，考察了水解反应温度、pH值对固定化酶活性的影响 关键词：聚合物载体；反相悬浮聚合；固定化酶；青霉素酰化酶 中阐分类号：Q555 文献标识码：A 固定化酶是近代酶工程领域中主要研究内容之～利用生物催化特性，在温和、无环境污染的条件下 解决化工、医药、轻工、食品和环境工程的应用技术，是实现绿色化学的重要途径之一青霉素酰化酶主要 欧美国家已开始用固定化青霉素酰化酶生产6-APA我国关于固定化青霉素酰化酶的研究工作起步较 晚，还主要靠进口价格昂贵的固定化载体或固定化青霉素酰化酶来满足半合成抗生素生产的需求‘-，“因 此，对青霉素酰化酶固定化载体进行研究具有重要的现实意义．本文将报道GMA—NVP—MBAA三元共聚 物的合成及其作为青霉素酰化酶固定化载体的研究结果 1实验部分 1．1主要试剂与材料 甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA，优级纯，洛阳恒光化工公司)，N．乙烯吡咯烷酮(化学纯，减压蒸馏后 备用，上海化学试剂公司)，N，N’一亚甲基双丙烯酰胺(MBAA，化学纯，上海化学试剂公司)，青霉素酰化 酶(PA)(浙江顺风海德尔公司)，青霉素G钾盐(河北制药厂) 12仪器与表征方法 FT—IR在NICOLET Magna IR550红外光谱仪上完成；固定化酶活性的测定使用MILTONROY COMPANY SPECTRONIC 21分光光度计，波长为415nm；用MICROMERITCSAsAP 2010测定比表面 积和孔径分布． 13聚合反应 在装有搅拌器、冷凝管和导气管的INl21瓶中，加入一定量的正庚烷、四氯乙烯混合悬浮剂和复合分散 反相悬浮聚合白色珠经丙酮充分洗涤抽提，室温下真空干燥共聚物用GNM(W)表示，其中。表示交 联剂MBAA占单体总量的质量百分数 固定化青霉素酰化酶的制备与活性测定见文献[3]酶活性用A*(U／g)表示． 收稿日期：2003．02—27 作者简介：薛屏(1962一)，女，博士生，教授；通讯联系人卢冠忠教授，博士生导师 第3期 2结果与讨论 2，1 熬聚物载体的红外腻谱及孔疑分布 N+乙烯睡晦烷酮介入共聚讶体系，使菇聚耪其膏较强的亲 水性，裁体偶联酶的能力明显提高．由实验得出，NVP与GMA 囊量比为1：t0、交联裁MBAA臻蘩为50％合成的共聚躲(GNM (50))，对青霉素酰化酶固定化效果十分显著．由图1(a)可见， GNM(50)聚合物在918、843、816cmo处出现了环氧基的特征 吸收蜷，表疆GMA革俸参与了聚龠反应．载体偶联裔霉素酰他2骶’1瓣。1嘲14影嚣。 酶后，环氧基团备特征吸收峰均未消失，吸收峰强度也未有明胤 图1聚合物GNM(50)(a)固定化前 懿变绝，说鞠与酶产生共按结金的黪氧基曩数疆强少．毙表露积 与袖)窭定纯鑫豹赶外萋谱 1 IR of 和孔径分布测定结果表明，GNM(50)聚合物的比表面为118．4Fig