放射免疫分析法的研究相思子毒素的药代动力学.pdfVIP

放射免疫分析法研究相思子毒素的药代动力学 李丽琴郑晓军 林福生 (北京药物化学研究所 北京 102205) 植物毒蛋白相思子毒素(abrin)通过抑制蛋白质合成而发挥其毒性作用，它可以抑制各种 肿瘤细胞及人癌移植物的生长，其作用机制不同于现在使用的抗癌药物，而且它对骨髓无抑制 效应，将它与化疗药物环磷酰胺合并应用，可以提高抗癌效应而不增加毒性。某些学者还利用 abrin或其A链与抗体偶联制备免疫毒素，得到具有肿瘤相关抗原靶特异性的细胞毒药物。在 毒素或毒紊复合物安全应用于人癌治疗之前，建立一种监测血中相思子毒素浓度的灵敏，特异 的分析方法，研究相思子毒素的药代动力学，可为临床检测患者血中毒素浓度奠定基础。 材料与方法 1材料 1．1‘试药 相思子毒素标准样品，相思子毒素抗血清由本室制备；BsA，PEG6000为BM公司产品； 驴抗兔抗血清，”5I标记的相思子毒素放射比度为30～35mCi／mg，为北京市原子能研究院协 助标记；其余试剂均为国产分析纯。 1．2实验动物 小白鼠，雌雄兼用。体重(20士2)g，海淀通利实验动物养殖厂提供。 1．3仪器 r一放射免疫计数仪为西安二六二厂出品；紫外分光光度计为日本日立公司出品；快速混匀 器为浙江金坛仪器厂出品；普通离心机为北京医用离心机厂出品。 2方法 2．1 放射免疫分析方法 鼠血浆(或待测血浆)倍比稀释，取10印1加入塑料离心管底部，再加入loopl适宜稀释度的抗 血清，100,ul 室温放置4．5h，加人0．5m1分离荆(含驴抗兔抗血清)，室温振荡1h，离心去上清，沉淀计数，以 Logit(B／B。)为纵坐标，以相思子毒素标准物浓度对数为横坐标，画出标准抑制曲线。 2．2精密度与准确度测定 设10管，同批测定，评价方法的批内精密度。上述三种浓度管分别于6天内重复测定6次，评 价方法的批问精密度。 分离血浆，每种浓度测定10次，以测定值／真值表示准确度。 2．3生物样品的制备 】53 心10min，吸取上层的血浆供测定用。 2．4相思子毒素的药代动力学 采集的血样用PBS作适当稀释，用已建立的放射免疫方法测定相思子毒素血浆浓度。用 型识别的依据。 结果 8 ’L…】吓民皿承骷厘 1孳￡蠢关篡篓蠢蒿荛燃制曲线，相思子毒素在。．。～12．。／zg．L。小鼠血浆浓度 按放射免疫分析方法制定标准抑制曲线，相思子霉累在o‘z～ 范围内呈线性关系。见图1。最低检出限为0．2pg’L～。 1 3 】6 1 9 27 2 5 2·- 3 ¨■q^¨_●一) 圈1小鼠血浆中相思子毒采浓度翻定标准田弱 2方法精密度与准确度测定 法的批 用小鼠血浆配制不同相思子毒素浓度的溶液，每种浓度设10管，同批测定，评价方 内精密度。分别于6天内重复测定6次，评价方法的批间精密度，结果见表1～2a 变异系 由表可知，由于其剂量之间的精密度不同，前者批内变异系数平均为4·32％，批间 数平均为7．15蹦，后者批内变异系数为8．06％，批间变异系数为11_50％。 (3．7土 ． 方法的准确性测定结果见表3。方法准确度为10Z-9～104-2％，平均离差为 寰3小鼠血浆样品分析的准确度评价 3药代动力学分析 采用放射免疫测定法测定小鼠血浆药物浓度，每一时间点测定3只小鼠，结果见表4。测 得的血浆药物浓度一时问曲线见图2。以