旋毛虫感染小鼠对p46重组抗原的抗体应答的研究.pdfVIP

!里苎竺!垦兰叁塞童童兰皇兰坌塞苎三奎垡壅查室竺兰!!姿兰查堡塑室堡兰苎 垡皇塑坌 旋毛虫感染小鼠对p46重组抗原的抗体应答研究 2 原丽红1付宝权1 P．Boireau 1刘明远1张亚兰1吴秀萍1李莲瑞1林本夫1卢强‘陈启军3 摘要： 以旋毛虫p46重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA 检测。结果表明以200条肌幼虫／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后第9d可检出抗体， 0 并于感染后35—42d达到最高水平，应用重组抗原检测时，感染后第1d可检出抗体．抗体水平 略低于用Es抗原，但是其消长规律基本一致，而且与阴性血清相比差异明显，抗体在117d后仍 维持在较高水平。 关键词： 旋毛虫p46重组抗原ELIsA抗体应答 旋毛虫肌幼虫感染宿主后，在其体内发育，依次经历成虫，新生幼虫，进入横纹肌纤维发育 为肌幼虫，完成其生活时史，宿主则相应地产生免疫应答，出现特异性抗体应答…。对旋毛虫感 染后宿主体内抗体产生及消长规律的认识不但有助于解决免疫诊断试验能否对旋毛虫病作出早期 诊断及判断是否现症感染而且在抗原性评价和免疫机理研究中也有重要作用。 ELISA因其高度的敏感性、特异性以及稳定、快速等特点，是目前对旋毛虫病进行流行病学 调查和生前诊断较理想的血清学检测方法。目前，ELISA所用抗原主要为旋毛虫肌幼虫排泄一分 泌(ES)抗原和肌幼虫可溶性抗原。但这些抗原成分复杂，旋毛虫体外不易培养，很难得到大量、 高纯度的抗原，使抗原生产成本很高，很难推广应用。因此，寻找特异、敏感的基因重组抗原， 是提高旋毛虫病血清诊断水平的关键因素之一。 kDa抗原 本研究利用免疫学筛选旋毛虫新生幼虫eDNA文库获得的编码旋毛虫新生幼虫p46 的WNl0 eDNA在原核表达系统中表达的重组蛋白为抗原口，3，…，检测了旋毛虫感染不同日龄小鼠 血清的抗体应答，为旋毛虫病的免疫诊断奠定基础。 1材料与方法 1．1旋毛虫虫株 保种。 1．2实验动物 封闭群雌性昆明小鼠，体重20～229，购自长春生物制品研究所。普通长白猪由本校实验动 物中心提供。 1．3试剂 G 和辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪lgG购自北京鼎国生物技术有限公司。 1 4抗原制备 1 4．1 旋毛虫肌幼虫ES抗原将旋毛虫感染35d后的小鼠剖杀，取骨骼肌剪碎，用l％胃蛋白酶、 1640 264 !璺!垫!堕兰宝塞查童圭皇兰坌室蔓三姿垡墨查室竺兰!!奎兰查竺望窒丝主苎 些皇整坌 培养液37℃培养24 h，培养液经透析浓缩后即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原，采用紫外分光光度 法测定蛋白浓度，．20‘C贮存备用。 1 42 重组抗原 编码旋毛虫p46 kDa抗原基因的克隆及表达见文献I”，诱导表达的重组蛋白以包 涵体形式存在，经过纯化后．采用紫外分光光度法测定蛋白浓度，。20C贮存备用。 1 5血清制备 1．5．1 旋毛虫感染猪血清实验猪经口感染旋毛虫肌幼虫10 000条／只，35天后采血收集血清。阴 性对照为健康猪血清。 1．5．2 旋毛虫感染小鼠血清以200条感染性肌幼虫，只感染小鼠，分别于感染后第．I、2、3、4、5、 33、35