真菌与细菌复合制剂理化性状及其对棉铃虫致病性研究.pdfVIP

第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 湖南师范大学 长沙2003．II8 真菌和细菌复合制剂理化性状及其对棉铃虫致病性研究 林华峰李世广张磊张莉 (安徽农业大学植保系合肥230036) 摘要：本文对真菌和细菌混合制剂的理化性状及对棉铃虫的毒力作用进行了试验，结果表明：混合制剂 在室温下保存一个月后，配方A、b混合菌液的理化性状相对稳定，且对棉铃虫毒力效果比单用真菌或Bt 效果好。从而为棉铃虫的生物防治提供了一条有应用前景的途径。 关键词。复合制荆，致病性，理化性状，害虫生物防治 苏云金杆菌(Bacillus 泛的一类微生物杀虫剂，它产生的蛋白质结晶毒素对鳞翅目、双翅目害虫杀虫效果较好。白僵菌 (Beauveria bassiana)是国内研究最多、应用最广的一种病原真菌，杀虫谱广。致病性强，易于培养。 另外，本课题组从发病率较高的烟青虫蛹分离纯化出一种青霉(Penicillium sp简称P．s)，预备试验 发现该菌对烟青虫有一定的致病性。 棉铃虫(Helicoverpaarmigera)为有代表性的重要害虫，其发生广，危害重，且极易对化学农 药产生抗性。微生物杀虫剂防治这些害虫有重要意义。在实际应用中，单用真菌见效慢，单用细菌 易产生抗药性，真菌细菌混用可望取长补短。为此，本文对所设计的复合生物菌液的理化性状及对 棉铃虫的毒力进行了初步研究。 l 材料和方法 1．1 供试菌种和虫源 苏云金杆菌(Bt悬浮液)为武汉绿鹰应用药业有限公司出品，4℃下保存。白僵菌菌株5S03， 莱氏野村菌菌株Nr96一l，绿僵菌菌株Ma4，均为实验室保存菌种。供试虫源为人工合成饲料喂养的 棉铃虫2龄幼虫。 1．2 细菌培养基和真菌营养液 细菌培养基：蛋白胨2．09，葡萄糖2．09，氯化钠29，K2HP04 0．0029，水200mL。 真菌营养液成分：l％的葡萄糖+l％的蛋白胨，等体积混合。 1．3 混合菌液的配制 称取一定量的真菌孢子粉放入无菌水中，充分振荡摇匀。再加入Bt乳液和所需辅剂进一步振荡 摇匀，使真菌孢子充分分散。所配菌液成分如表l所示。 1．4混合菌液理化性状的观测 刚配制好时，观察混合菌液的颜色，沉淀情况，测定其pH值。一个月后，再测定一次。 1．5混合菌液生物活性的测定 平板稀释法测Bt乳剂及混合菌液的活芽孢浓度。将Bt原液、放置一个月的混合菌液按lO倍的 比例稀释成16个浓度梯度，再从109．10”个浓度的菌液中移取0．Iml的菌液，均匀涂布在细菌培养 基平板上，每个浓度设三个重复，25±l℃的培养箱中培养24h后，数出每皿中的单菌落数，以30-300 为有效区间，按下式计算芽孢浓度： 活芽孢浓度(个，mI)=(皿内菌落数×稀释倍数)／nil内加入的菌液量(m1)。 林华峰等：真菌和细菌复合制剂理化性状及其对棉铃虫致病性研究 1．6混合菌液对棉铃虫的毒力测定 重复。2龄幼虫在经过消毒处理过的塑料培养皿(直径5cm)中饲养，用猴头喷雾器对虫体和饲料 进行处理，置光照培养箱(除菌)，底部用的瓷盘放置清水，温度控制在25±1℃，相对湿度在80。90％， 以清水喷雾处理作为对照。接种后，每日定时观察和记录死亡虫数至化蛹，将每天检查的死虫在密 闭塑料培养皿中保湿培养，培养温度25C，查僵虫数，计算僵虫率： 僵虫率=(僵虫数，歹E亡虫数)×100。 表1 混合菌液成分 混涮洒帕《鄹吣@ ns0眦缸)自睇且hd) ^ 05 ∞ a ¨ ∞ B O2 0 005 b 眈 0 005 C O2 0