鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的研究.pdfVIP

第九届全国中西医结合肿瘤学术柳讨会论文集 活血化瘀法，是治疗肿瘤的常用法则之一。近年来，随着对肿瘤治疗的深入研究，认为活血化瘀药 物，有抑制癌细胞的生长，防止或减少癌栓形成和转移的作用。我们认为转移性肝癌属中医学的瘸积范 畴，而癀积的形成与瘀血的凝滞有着密切的关系。王清任所谓“肚腹结块。必有形之血”是也。本组病 例均为转移性肝癌。系由其他脏器致病转移而来，说明病延已久，久病有瘀，在所难免。而肝主疏泄， 为藏血之脏，气为血帅，气行则血行，气滞血瘀，是形成肝癌的主要病因之一。病至晚期，气血两虚， 气虚不能运行血液，则气虚又能致瘀，如此气滞血瘀，循环往复，欲求瘸积消退，实非易事。 本方运用当归、赤芍、莪术、三棱、郁金、炙天龙活血祛瘀：炙鳖甲、夏枯草软坚散结；白术、 茯苓、白芍、苡仁健脾和胃；辅以半支莲、蛇舌草等解毒抗癌，加上化疗药物的抗肿瘤作用，中西医 结合使原发肿瘤及转移肿瘤同时得到杀伤，对机体的正常功能得到有效的保护，使得患者生存期得到 有效延长，生存质量也得到明显提高。但本病是进行性消耗性晚期肿瘤，预后不良，如何提高疗效， 控制病情发展，进而达到消除肿瘤的目的，是我们劳务人员尚需进一步研究的主要课题。 鲜壁虎提取物抑制c6胶质瘤细胞增殖和凋亡的研究 谢爽 王学美 谢东泽 北京大学第一临床学院 壁虎又名守宫，是我国传统的治疗肿瘤的中药材。含与马蜂毒相似的有毒物质和组织胺类。但临床 中使用的是除去内脏的干燥全体，鲜壁虎极少使用，且目前国内尚未见鲜壁虎提取物对C6胶质瘤细胞作 用的报道。本实验首次观察了鲜壁虎提取物对c6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机理。 1．材料与方法 1．1药物由北京雅泉中药研究所提供。加工过程：活体无蹼壁虎冷冻处死，清水洗净，粉碎匀 IJ 浆，冻融10次，自然沉淀取上清，低温离心10000r／min离心20min，取上清，0．22m膜过滤除菌， 一70℃冰箱保存备用。 1．2材料与试剂 C6胶质瘤细胞购自中国医学科学院神经外科研究所；I-嗍培养基：美国GIBCOBRL公司：胎牛血 公司；蛋白酶K：SIGMA公司；RNasek 公司；PI／AnnexinV-FITC试剂盒：晶美公司；碘化丙啶(PI)：SIGMA公司。 1．3主要仪器 Dickinson 流式细胞仪(Becton Ⅱ型)：日本。 1．4方法 大会交流 137 察细胞生长状况。培养72小时后。加入MTTIOH 入DMSOl00u 为参考波长，在全自动酶标仪上读取各孔吸光度(A值)，每组8孔。肿瘤细胞生长抑制率的计算：抑 制率(％)=(对照组A值一实验组A值)／对照组AXl00％。 1．4．2细胞凋亡的定量检测：用流式细胞仪测定。取对数生长期c6细胞，分别加入不同浓度的 液清洗2次，用1XBinding V-FITC标记 15分钟，1小时内流式细胞仪检测。数据资料以软件收集分析。 蓝染色。光镜下定位。LKB一5型超薄切片机切片，铀一铅双染色，透射电镜下观察，照相。 1．4．4 Tris—BCL 经D-hanks缓冲液清洗，在1×106细胞沉淀中加入细胞裂解液(10姗ol／L EDTAPh8．0，75mmol／L 入5MnaCl300li Tris-HCLPh8．0，lmmol／LEffrA Rnase 量TE缓冲液(10mmol Ph8．0)溶解。加入200Mg／mlA，37℃ u 水浴30分钟，取151上样缓冲液，点样，于1_5％琼脂糖凝胶电泳，用Lambda 作为分子量参照，紫外灯下观察，照相。