用噬菌体递呈随机肽库研究丙型肝炎病毒(HCV)NS5ab区B细胞表位.pdfVIP

显示，山西省吸毒人群的HCV基因型以IIj15型为主(78．9％)，其次为Ill／2a 山西省分型阳性者中口吸者居多(84．2％)。山西吸毒者HCVlb型分离株 在其核心区的1“个核苷酸序列中，与日本、河北、上海、湖南及邻省河北 的同源性都在94％以上，与湖南株的同源性最好(97％)：与日本株的差异 小于其它地区分离株日本的差异：而相应区段的氨基酸序列与日本的差异最 序列和相应氨基酸序列中与日本的同源性分别为94％和96％，氨基酸的变 碱基的变异是所有中国(Ib型)株的共同特征。结论：山西省吸毒人群中 HCV基因型以11／Ib为主。经口吸毒在HCV传播上的重要意义应引起 重视。在同一亚型中，山西吸毒者的HCV分离株在核心区部分序列与日本 及国内其他地区的分离株有～定差异，但不显著。 关键词：丙型肝炎病毒 吸毒 抗HCV 聚合酶链反应 基因型 序列测定 用噬菌体递呈随机肽库研究丙型肝炎 病毒(HCV)NS5ab区的B细胞表位 侯利华 杜桂鑫王海涛 军事医学科学1宪擞生物流行痛研究所 HCVNS5ab蛋白是丝氨酸蛋白酶的特异切割底物．抗原性较强。我们从 NS5ab区基因，在原核系统中使用 一名慢性HCV感染者血清中扩增出HCV pQE载体表达出该蛋白，纯化复性后，得到可溶蛋白。检测i00份HCV阳性 血清，阳性率为63％，说明该蛋白有较好的抗原性。将此蛋白与Sepharose一4B 耦联，纯化出抗HCVNSSab蛋白的多抗，用此多抗筛选噬菌体递呈随机十二 肽库。三轮淘洗之后，噬菌体得到明显富集。挑取20个噬菌体制备原种， 3 经过间接ELISA和竞争抑制ELISA鉴定后，选取13个克隆测序。在这1 1 个序列中，出现了完全相同的序列c5／17；9／12jo／13／18】，其中8个序列 与HCVNS5ab蛋白的序列有较高的同源性(包括相同序列)，我们初步确定 在HCVNS5ab蛋白的i-8aa、155—162aa、219—227aa存在线性表位。这个 5ah NS 结果与我们由计算机软件预测的抗原区相吻合。其它5个序列和HCV 蛋白的序列无明显的同源性，这些序列所递呈的表位可能有两种情况：一是 这些序列为线性表位的模拟位(mimotope)，另一种情况是这些表位可能为 蛋白质抗原的非连续性表位。对于这些序列我们拟将其表达，用以筛查大量 血清以确定其抗原性后，免疫动物，希望能找出中和性表位，为研制丙型肝 炎病毒疫苗和新一代检测方法奠定基础。 丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体的研制 徐元基凌世淦陈晓华‘刘荷中 50 军事医学科学院基础医学研究所北京1008 北京市武警总队第二医院捡验科北京1oo071 Cvirus，HCV)是造成输血后非甲非乙型 丙型肝炎病毒(Hepatitis 肝炎的病原体，主要通过输血和血液制品传播。由于当前尚没有开发出有效 疫苗预防HCV感染，且临床唯一有确切疗效的于扰素治疗疗效有限．还常常 产生抗药性。因此，及早检测发现HCV感染者以切断传染源，确保临床用血 和血液制品安全便居于十分重要的地位。我们利用自己重组表达的HCV核心 蛋白为免疫原，研制了4株抗HCV核心抗原的单克隆抗体(McAb)，与其他 病毒抗原无交叉反应。这为进一步建立简便、快速和特异性检测HCV感染者