由淀粉酶法生产海藻糖地研究（Ⅱ）.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨论会论文集 1998 由淀粉酶法生产海藻糖的研究(ID 缪静朱利丹毛忠贵 (无塌轻工大学生物工程学髋无锯214036) 捐要从土壤分离得菌株*x．10能将淀粉液化液转化为海藻精．转化途径已经初步验证．转 化反应的条件经单因子优化实验后，使戢一10的相对酶括提高．对微生物的产酶培养条件进 行了研究，得出了酶活较高的微生物培养方法(主要包括培养基)． 关键词海藻糖，反应条件，培莽条件，优化 学科分类号Q939．97 海藻糖“¨“(Trehslose)．．是由两分子的毗哺环葡萄糟单体以％口一1．I键联结的非迁原 性双糖．它除了具有一般低聚糖的特性外．还兼有独特的生物学特性，因而在医药．食品． 化妆品，农业领域具有广阔的应用前景Ⅲ，成为当前图内外研究的热点． 殴美国家及日本在这方面的研究比较深入，尤其是日本“h“’．相对而亩．国内对海藻 糖的研究起步较晚．鉴于我国是淀粉生产大国，淀粉潦加工向来是重要课题．以淀粉为底物 酶法生产海溅糖，不仅是淀粉深加工的重要途径之一，又是开发海藻糖工业化生产的重要途 径． 1材料和方法 1．1供试菌株 WX-10 1．2方法 1．2．I酶反应条件的优化 (1)培养基和培养条件：摇瓶(产酶)培养基：麦芽糖2％；蛋白胨O．s％；牛肉昔O．1％： 细胞． (2)海藻搪生物合成反应的基本条件：5nll淀粉液化液作为底物；5Inl 20n恤I、pHT．o的磷酸 缓冲液．以上各反应物总体积lOml．静息细胞lg(湿重)．甲苯0．2m1．35C反应12hr．水 浴煮沸lO分钟终止反应．取滤灌进行进行分析． (3)海藻糖生物合成反应条件的单因子优化 ^底物(淀粉液化{裹)：浓度；DE值 B反应温度和反应时问 C反应体系缓冲}葭的pIi和浓度 1．2．2微生物产酶培养条件的优化 (1)酶活定义”’：5mi踮值15、lO％(“v)韵可溶性淀粉溶液，加入5ml无细胞抽提液(作 为原始酶液)，pH7．0，反应体系磷酸缓冲渡浓度10叫．40C保温60分钟，t00C水浴煮沸 lOain结束酶反应，毋Lc分析反应液中海藻糖的量，每分钟内相当于使海藻糖增加l“mol 的酶量定义为一个酶活单位． C2)培养基的优亿(单茵于实验) ^内溺平板(斜面)培养基t普通细菌培养基 B产醇培养基‘同前) C基础碳源培养基： 酵母膏0．“．硫酸镀o．5％，磷酸氢二钾0．1％，磷酸二氢钠0．1x．硫 酸镁0．5％，pfl7．5 D碳源培养基：在培养基c的基础上分别加入不同浓度的各种碳源 E基础氯源培养基t麦芽糖2％，酵母膏0．1％，磷酸氯二钾0．1％，磷酸=氢钠0．1薯，硫酸 镁0．5x，州7．5 —273— 第二届全国发酵工程学术讨论会论文集 1998 F氮源培养基·在培养萋E的基础上分别加入不同浓度的各种氟源 G微量元紊培养基t在培养基日的基础上加入不同浓度的微量元素 2结果和讨论 2．1酶反应蠡件优化结果 (1)底物：底钧拢粉液化液的浓度和DE值对海藻糖生物合成的影响．显示在豳1(a)和圈 1(b)．由图。浓度为25％·DE为20的淀粉液化渣是海藻糖生物合成的台适底物． ：：[ i一 ：： ☆，_{}v_j 。，。 O }口 20 ，0 4d CG·o·_tr●thd●f轴●Itr●t·(pEl，，‘* DEqf S●l“，-t●tC：I口X ，暑?：黯0寰盘i—l兰：：黑?。， 。m b。ll‘。f”fta；¨mt“dl曼嚣：只船曼 ●■●‘tl●t‘ 明la,b为缱冲渍浓度lO_‘埔T．0的反直体系，反应温度帅℃；反应时间10hr． (z) 反应温度和反应时闻t温度和时问