微生物酶法转化巴豆甜菜碱制备L-肉碱探究.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨沧会沧文集199,8 微生物酶法转化巴豆甜菜碱制备L_肉碱研多r 孙志浩王蕾郑璞金梅 (江苏省微生物研究所无锡214063) 擒蔓进行了微生物酶法转化巴豆甜菜碱制备L-内碱的初步研究．通过缔选和诱变得到一株产L-肉碱水解 L- 酶活力高的茁株大肠杆茁丘曲舭c矾swl3吼在最适条件下水解159JL巴豆甜菜碱，最高可得到79／L 内碱。mol转化率为42％．巴豆甜菜碱可以用拆分废弃物D_内碱脱水带懵． 关麓河L-内碱，巴豆甜菜觎，大肠杆菌，酶法转化 butyrobetaine)，是动物体内与脂肪酸代谢有关的化合物。它的主要功能是作为载体将长链脂肪酸 从线粒体膜外输送到膜内促进脂肪酸的B一氧化。I|蠡床上L一肉碱作为药物主要用于治疖b力衰竭， 缺血性心脏病，心律失常．降低血脂，治疗肥胖症以及治疗肉碱缺乏综合症，还作为高能输液使用。 它也是—种重要的机能性食品添加剂，用于婴儿和体弱多病者的强化营养，增强运动耐力以及减肥健 美。另外，作为饲料添加荆也得到了广泛应用。沁4 用合成DL-肉碱进行拆分的方法，收率低，成本高。我们从1994年开始进行酶法转化制各L- 肉碱的研究J利用微生物所产生的L_肉碱水解酶(L—carnitinehydrolyase)水解巴豆甜菜碱生成L． 肉碱．巴豆甜菜碱可以用环氧氯丙烷廉价合成， 亦可从DL一内碱或其拆分废物D一肉碱脱水制各． 因此可望成为一种高效率．适合于产业化的制备L一肉碱的低成本方法。 l材料与方法 1．1微生物菌种 Coli ProteusmirabilisATCCl2453，最国JjSWl3．12,本课题组保藏．ESWl3--C017，中国普通 0276)。 微生物菌种保藏中心保藏(CG舡C 1．2试剂与原材料 巴豆甜菜碱由DL一肉碱脱水制各，卜肉碱标准品及酶法测定试剂购自Sigma，其他试荆与原材料市 售． 1．3徽生锯瞎葬基硬产酶条件 1．3．1斜面培养基：肉汤琼脂． 1．3．2发酵培养基：富马酸巍蛋白胨1‰酵母膏1％磷酸氢二钠0．3％，硫酸铵0．5％．硫酸镁0．0鼢 磷酸=氢钾0．1‰巴豆甜菜碱0．弧pH7．0 1．3．3发酵产酶方法： 斜面培养：30℃24h 摇瓶培养：30℃24h，150r／min，三角瓶装量75ml／500田1(或限氧)． 粗酶收集：3000×g20rain离心． 1．4酶转化方法 1．哇．1底物溶液：巴豆甜菜碱1．5j6． 1_t2酶转化反应：撕需酶浓度加底物溶液J搅勾，37C保温静止转化24h，静诹上清液，酶回 收继续反复分批转化。 lI5产物提取纯化方法 蓿弱面葫颐广 ——333—— 第二届全国发酵工程学术讨论会论文集1998 转化液脱色，上柱洗脱．洗脱液真空蒸发。浓缩，瀚秘结晶，干燥，即为成品。 1．6分析方法 L6．1L_肉碱含量测定：酶法(潲法)。啪 1．6．2肝Lc测定由天津药物研究院测定，红外光谱由无锡轻大理化中心测定。 2 结果 2．1产韵萄株选育 2．1．1初筛 参照文献报道具有巴豆甜菜碱水解酶的微生物种属，从本课题收集保藏的现有菌株中筛选，得 到四株具产肉碱能力的试验菌株，采用前述摇瓶产酶。用巴豆甜菜碱底物(15以)进行酶转化，其产酶 结果比较见表1． Tablcl sc豫岫llgofk咖岫如邮∞血cillg懿岫 33 2．17 P5“domo㈣sp．m Rd幽m∞∞妒B56 1．97 ＆ck耐妇coiisWl3-12 2舶