豆豉纤溶酶的纯化和其性质研究.pdfVIP

研究论文与综述 全国第六届工业生化学术会议{1999．福建)论文集 豆豉纤溶酶的纯化及其性质研究 t钉家麒 §?磬械j}s t 1：)0008) 河南绿十字生物j E研宄听，郑州4 (郑州牧^．j+杜高等专科学坟，郑州450008) 摘要：由发一}走豆豆豉)≯离纯化一荆7活-}生强的纤i吝酶．采用硫酸铵盐忻se— 8-，200色话纯化的纤溶酶在SDS—PAGEL呈一‘务蛋白 DhadexG一10I仁Sephacryl J 61 带，分子董为3 0kD，等电点80．2+纯化秸数44倍，纯酶比活31，020U14／mg 由于弦啤，LL有较强的催化#缸蛋白原溶解的作nl，田而有望 pro，活性回收．68％ 成为一种新型抗瞳橙药物或预防皿险舾的保健食品。 关键词：纤器酶，纯化，豆强，纳童激酶 疆豉是我圜人民柏传统发酵大砭Fj6，已味道鲜美，溉能艄味，近能人药，具有开胃增食， 消积化滞．驱风散寒卜屉预防心脑廊销犯、病等功效， 作扦从r丁蚁·f-分离纯化一种具有较高纤溶活 性的溶栓酶并初步研≯|，其酶学性』!i=[ 1拟帮I与}f{蓉 ‘略)。 2结果上j讨论 2．1豆鼓纤溶酶的纯4{： 豆豉纤溶酶纯化组粜如袁1 托1 L，瞳纤溶酶纯化结果 纯化步骤 总沽，J 儿 产串 “A化倍数 一 (UK】 g 活星】 ¨h (倍1 培养液 155×10s 100 】 G 10( l 25x1驴 4 81 28 Sephadex S一200 ㈣鹦一刚．耋| 1．0×10s ㈣垫黑㈣2，， 68 44 Sephacryl G一 从5L发酵踱巾得川的豆融纤溶酶息活J了为155×106昧激酶单位(UKj经Sephadex 1 00和SephacTyls一2i】O色谱纯化后的样品经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检查乃单蛋白条带， 表明得到『百豉纤溶酶-】勺纯酶。纯化俯数为44倍，活性阿收率匀68％。 2．2酰胺水解酶活性 奉研究采用5种台『J也的小分f肽件为眨匣底物表2显示，亘藏纤溶酶最敏感的底物是辐草杆 菌蛋白酶和牛凝乳蛋白酶的底物，其扶丝血浆纤溶酶底物(S2251)，对箕余酶底物活性较低。 实验结果表明，tt!爨坪溶酶有其特异的球解蛋臼的氨基酸作用和识别值点， 162一 研究论文与综述 全国第六届工业生化学术会议f1999，福建)论文集 丧2 豆豉纤溶酶埘儿种合成底物的活性比较 2．3酶的分子量 SDS—PAGE测得旺豉纤溶酶分j’量为31，000z^尔c眠为·种r礼链多肽酏， 2．4酶的等电点 在1EF—PAGE中九J]tptt3．5～10Ampholinc帆测，然jii}月pH8—9 61 02 将IU泳后的凝胶条带精确切割，浸出两比电解晒．测得嗣豉坪济酶等电^匀8 2．5酶的稳定性 2．5．1酶的热稳定性 O)． 卜37C卜测定酶}削牛 将酶溶FO．2mol／L硼酸缓冲液【pH7住