丙氧鸟苷诱导转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因人肺腺癌细胞A549凋亡探究.pdfVIP

912 【文章编号]10∞一4718f∞00)】0—0912一∞ ·短篇论著· 丙氧鸟苷诱导转单纯癌堕堕麦胸苷激酶基因 人肺腺癌细胞A549凋亡研究 何祥梁1， 郭先健2， 钱桂生2， 蒋小忠1 (1第一军医太学珠江医院呼吸科，广东广州5102救2第三军医大学新桥医院呼嗳研究所，重庆400037) 【蕾戛】目的：观察丙氧鸟昔(Gcv)对As49一TK细胞的作用与诱导细胞粥亡的关系。方法：A549一 TK、^549两种细胞经卯岬·帆ccv作用3～5d后，甩电镶、流式细胞仪、细胞凋亡原位检涓法(1训)观察 细臆捅亡。结果：电镜下发现A549一TK细胞有凋亡特征：如羽亡小体、半月征、核浓缩，流式细胞仪发现 32％± —婚静一堡塑照有亚岛q峰，罚亡细胞占12．21％±1．66％，而^549细胞无岛cI峰，凋亡细胞占1 0．36和，两者比较P(0．01。结论：Gc、T诱导A549一TK细施捅亡。 【主囊词] 肺肿瘤；基西疗法；鸟苷 [螂]h鹕嘶叩1舾n皇；G哪e吐料。阿；c咖均出e [中田分粪号】734．2 [文献标识码】A vi曲一I 进行荧光染色，经1∞目尼龙网过滤，用FAcs400型流式细 单鲍疱疹病毒1型胸苷漱酶基因(berp岛吐呷k 胞仪测定每个细胞的荧光强度。细胞经徽机用细胞周期分 曲面th鼬e勇眦，l俘vl一1K)是一个药敏基田，即转导恢 析软件c0InT分析求出。 基因的细胞对抗病毒药物丙氧鸟苷(瓣ID证。Gcv)敏感， 毙被其彖灭，有关其杀灭瘤细胞的机理，目前认为与诱导细 四、T岫d法检测细胞凋亡 l{j．{}-0‘，tl_．1：。，l-!f{l 胞嗣亡有关。奉研究运用电镜、流式细胞仪(白wceⅡ麟幢h 以上两种细胞粘到玻片上．用4％多聚甲醛固定lO 嘲)、未墙脱氧核苷酸转移酵升导的去氧三磷酸尿苷(de，f咖，然后用PBs洗两遍，按宝曼公司提供的细胞嗣亡原位 de一 检测试剂盒说明书操作。 uIirt，du作)缺口末端标记法(蛔Ⅱinal o珂加恼曲啊】IIl吐e 哪d∞州ka豳㈣lnedi酬d唧mtk耐㈧吨， r【Ir瞰．)j瞳察转脚l—TK基因的肺癌细胞经GcV作甩后 结 果 诱导细胞凋亡情况．从而阐明聊Gcv系统杀灭肿瘤细胞 一、扫描电镜观察结果表明A549一TK细胞有明显凋 的机制。 亡特征，如细胞核皱缩，核呈半月征、凋亡小体形成见图l、 图2。 材料和方法 一、主要材料 人肆赡密细胞A瑚购自上海细胞所，转TK基因人肺 赡囊纲矗A5静(简称^蛐一TK)由作者奉人梅建了耆1K基 因的遵转录病毒表达载体后，甩电穿孔法转化、筛选、保 存…。Gcv购自瑞士Redt公司，细胞凋亡原位检测试剂 盘(宝曼公司)。l诖曩Ⅱ1640购自Gib凹公司。 二、电慵观察 ^5帕一T，【、^5静两种对救生长中期培养细胞各2瓶， 甩台50#啦d，I．ocv的B咖1640培养基培养4d，常规消化 细慝，甩璐洗两童，^心留细胞沉淀，取部分细胞加入度 二醛固定量4℃8 h．1％09时再固定．环氧树脂Ep0