甲基荣莉酸对喜树中HMGS 基因表达的影响初探.pdfVIP

第16卷第6期 井冈山医专学报 V01．16No．6 2009年11月 OF MEDICALCOLLEGE NOV．2009 JOURNALJINGGANGSHAN 甲基荣莉酸对喜树中HMGS基因表达的影响初探 周宪林 (上海市复旦实验中学，上海杨浦200433) [摘要】3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGS)基因是利用基因工程技术代谢调控喜树碱生物合成的重要 靶点和关键酶基因之一，甲基茉莉酸(MJ)是植物次生代谢工程中比较常用的一种化学诱导子，对于活性次生 代谢物质的合成及积累具有调控作用。本实验通过用10mg／L甲基茉莉酸喷洒喜树幼苗，来观察其对喜树中 HMGS基因表达的调节效应。实验结果表明胚轴在处理12h后，HMGS基因表达量达到峰值，而子叶在被处理 后。甲基茉莉酸对HMGS基因有抑制作用。 [关键词】喜树碱；甲基茉莉酸；HMGS基因；调节 [中圈分类号】Q753【文献标识码]A [文章编号】1008—2735(2009)06-0013-03 表达，积累植物体的次生代谢产物，所以可以利用它来提高植 喜树碱(Camptotheeins，CPT)是从喜树中提取的一种特有 的生物碱，是目前最有效的天然抗癌药物之一。目前国内外对 物次生代谢产物的产量M。甲基茉莉酸(MJ)是植物次生代谢 于喜树碱提取技术的研究发展已13趋成熟，主要有如下几个 工程中比较常用的一种化学诱导子，本研究拟考察MJ对喜树 方面：(1)从喜树植株中提取。由于喜树的天然资源有限，加之 3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A合成酶HMGS基因表达的调节 喜树碱在植物体内含量较低，所以从天然的喜树中提取喜树 效应，为后续利用基因工程技术代谢调控喜树碱生物合成提 碱的方法远远不能满足人们对喜树碱日益增长的需要。(2)化 供初步的参考依据。 学合成。随着现代生物学技术的不断发展，利用分子生物技术 1．2实验材料喜树种子，采于康健园。、 将喜树碱牛物合成途径中的关键酶基因导入喜树中，获得转 1．3 实验试剂 ，nANGEN公司的植物总RNA提取试剂盒； mol／L mmol／L 基因的细胞系、组织或再生植株，并进行大规模的培养，已经 TakaRa试剂盒；10×PCRbuffer；25 Mgcl2；10 DNA mmol／／L 成为实现从根本上提高喜树碱含量的最佳途径。而开展喜树 dNTP；Taqpolymerase；Template基因组；10 碱生物合成途径及催化酶基因的研究是实现其代谢工程的前 primer；10mg／L甲基荣莉酸。 提和基础。 1．4实验仪器PCR仪、离心机、震荡器、琼脂糖凝胶电泳仪、 3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGS)是MVA途恒温培养箱。 径中的一个重要的代谢酶，能够催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰 1．5实验步骤 辅酶A缩合生成3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A，随后在HMG—1．5．1种植喜树幼苗从康健园中捡取今年新掉落的喜树 CoA还原酶(HMGR)的作用下生成甲羟戊酸(MVA)，甲羟戊酸果，剥去外层厚角质层果皮，取出其中的种子，从中挑取大颗 经焦磷酸化和脱羧作用形成C5的IPP，从而为喜树碱合成提饱满的种子，用自来水浸泡数小时，使种子充分吸水。切除种 供通用前体。因此，HMGS基因是利用基因工程技术代谢调控子基部胚乳的一部分，然后埋在混合黑土珍珠岩培育花土中， 喜树碱生物合成的重要靶点之一。HMGS基因先后在红豆杉，330颗种子平均分为8小组进行培养，先露天常温种植数天， 橡胶树及油菜等植物中进行了分离克隆和表达分析，但有关 待胚芽有冒出迹象后，移置恒温培养箱中培养成苗，种植过程 喜树HMGS基