粪便标本中 SFRP1和 WIF-1基因启动子甲基化在大肠癌早期筛查中的意义.pdfVIP

山东医药2014年第 54卷第33期 粪便标本中SFRP1和 WIF一1基因启动子 甲基化在大肠癌早期筛查 中的意义 张 虎 ，张 平 ，江 军 ，李素迎 ，袁 林 ，齐 健 ，朱尤庆 (1武警湖北省总队医院，武汉430060；2武汉大学中南医院； 3湖北省肠病医学临床研究中心、湖北省肠病重点实验室) 摘要：目的 探讨联合检测粪便中分泌型卷曲蛋白1(SFRP1)和Wnt途径抑制因子一1(WIF一1)基因启动子甲 基化作为大肠癌 (CRC)早期筛查指标的可行性。方法 收集48例 CRC患者、35例大肠腺瘤患者、32例大肠增生 性息肉患者及30例健康人的粪便样本，采用甲基化特异性PCR技术分析样本 中SFRP1和WIF一1基因启动子甲基 化状态。结果 CRC患者粪便中SFRP1和WIF．1基因启动子甲基化率分别为68．8％和60．4％，腺瘤患者分别为 57．1％和42．9％，增生性息肉患者分别为21．9％和 18．8％；两者联合检测CRC和大肠腺瘤的敏感度分别为77．1％ 和65．7％，特异度为93．3％。2个基因甲基化水平在 CRC和腺瘤患者的粪便样本 中均显著高于增生性息肉和健 康人群(P均0．05)。此外 ，SFRP1和WIF一1基因甲基化与临床病理特征无明显相关性。结论 检测粪便 中 SFRP1和WIF一1基因启动子甲基化有望成为CRC早期筛查的一种非侵人性检测方法，在早期筛查和诊断中具有潜 在的应用价值。 关键词：大肠肿瘤；粪便；甲基化；分泌型卷曲蛋白1；Wnt途径抑制因子一1 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2014．33．023 中图分类号：R735．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2014)33-0054-03 大肠癌(CRC)是 胃肠道常见的恶性肿瘤，早期 肠等侵人性操作；CRC患者未行术前放化疗。另选 发现、早期诊断是降低 CRC发病率、提高生存率的 择30例性别、年龄匹配的健康人作为对照组，全结 有效手段。目前常见的CRC筛查方式包括粪便潜 肠镜检查均为阴性。 血试验、电子结肠镜、仿真结肠镜检查等，这些检查 1．2 方法 存在敏感性和特异性低、需要严格的肠道准备导致 1．2．1 粪便样本采集 收集受试者术前或肠镜检 患者依从性差、对早期CRC的检出率低等缺陷。表 查前 自然排出的新鲜粪便样本，一8O℃保存待测。 观遗传调控机制是一种可遗传的基因功能调控方 1．2．2 DNA提取 称 取 200mg粪便，使用 式，DNA异常甲基化的改变是表观遗传修饰的主要 QIAamp粪便DNA提取试剂盒 (Qiagen公司，德国) 方式之一。我们的前期研究显示，SFRP家族基因启 提取DNA。引物序列由上海生工生物工程公司合 动子甲基化在早期 CRC组织 中具有高频 甲基化。 成 。上 游 引物 ：5一TGGTGATGGAGGACGCTCAG— 本研究通过检测 CRC和大肠 良性病变患者粪便标 CAAGT-3，下游弓f物 ：5-AGCCAATGGGACCTGCTC— 本 中SFRP1和WIF．1基因启动子的甲基化状况，探 CTCCCTYGA一3，扩增产物长度 133bp。25IxLPCR 讨二者作为CRC筛选标志物的可行性。 反应体系：上下游引物各 1~mol／L、模板2 L、PCR 1 资料与方法 Mix12 L、双蒸水9IxL。PCR反应条件：94oC3 1．1 临床资料 选择2012年3月一2013年3月武 min，94oC、62oC、72oC各 30s，35个循环；72℃延 汉大学中南医院住院患者 145例，其中CRC48例， 伸7min。取5 PCR产物行3％琼脂糖凝胶 电 男24例、女24例，年龄 19—86岁、平均61．1岁；大 泳，凝胶成像系统观察并保存结果。 肠腺瘤 35例，男23例、女 12例，